ROS活性氧YZ剂 / ROS清除剂10ml使用说明书实验操作步骤:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量为 1mL ,其他培养器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此类推;对于细胞悬液每50~100 万细胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取适量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超纯水的比例稀释JC-1 。剧烈震荡充分溶解并混匀 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色缓冲液(5 ×),混匀后即为 JC-1 染色工作液。
2、阳性对照的设置:
把试剂盒中提供的CCCP(10mM )推荐按照1 ∶1000 的比例加入到细胞培养液中,稀释至10uM ,处理细胞 20 分钟。随后按照下述方法装载 JC-1 ,进行线粒体膜电位的检测。对于大多数细胞,通常10uM CCCP处理 20 分钟后线粒体的膜电位会完全丧失,JC-1 染色后观察应呈绿色荧光;而正常的细胞经JC-1 染色后应显示红色荧光。对于特定的细胞,CCCP 的作用浓度和作用时间可能有所不同,需自行参考相关文献资料决定。
3、对于悬浮细胞:
(1)取 10~60 万细胞,重悬于 0.5mL 细胞培养液中,细胞培养液中可以含血清和酚红。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,颠倒数次混匀。细胞培养箱中 37 ℃孵育20 分钟。
(3)在孵育期间,按照每 1mL JC-1 染色缓冲液(5×)加入 4mL 蒸馏水的比例,配制适量的JC-1 染色缓冲液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育结束后,600g 4 ℃离心3 ~4 分钟,沉淀细胞。弃上清,注意尽量不要吸除细胞。
(5)用JC-1 染色缓冲液(1×)洗涤 2 次:加入 1mL JC-1 染色缓冲液(1×)重悬细胞,600g 4 ℃离心3~4 分钟,沉淀细胞,弃上清。再加入 1mL JC-1 染色缓冲液(1×)重悬细胞,600g 4 ℃离心 3~4 分钟,沉淀细胞,弃上清。
(6)再用适量 JC-1 染色缓冲液(1×)重悬后,用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察,也可以用荧光分光光度计检测或流式细胞仪分析。
ROS活性氧YZ剂 / ROS清除剂10ml使用说明书注意事项
(1)本试剂只适用于实验,不适用于临床检测;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙锭)有毒性,能通过皮肤吸收,对眼睛有刺激作用,使用时需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。在处理和标记时,尽可能在暗处进行。在孵育阶段,用铝箔包裹容器或置于抽屉中。细胞标记后,在暗室内用显微镜观察;
(4)整个操作过程动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞,尽量在4℃下操作,以免影响细胞状态。
(5)在细胞洗涤的zui后一步,请尽量将上清弃净,以免PBS残留,有可能会影响实验结果。
(6)为防止荧光衰变,宜在1小时内进行流式检测。
(7)PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,建议首先进行Annexin V-FITC染色,zui短可在上机前5分钟再加入PI染色。
PC-12(大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞) 5×106cells/瓶×2
肺成纤维细胞Many types of cells包装:5 × 105次方(1ml)
CDH1 Others Rat 大鼠 E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 人细胞裂解液 (阳性对照)
CCRF-CEM细胞,人急性淋巴细胞白血病T淋巴细胞 小鼠白血病细胞,C3细胞 人肝窦内皮细胞cDNAHHSEC cDNA
大鼠肝细胞;BRL
CT26.WT(小鼠结肠癌细胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0198RM-1(小鼠前列腺癌细胞)5×106cells/瓶×2 人APP基因转染CHO细胞株;7WD10
小鼠小胶质细胞MM
FAM19A2 Others Human 人 FAM19A2 人细胞裂解液 (阳性对照)
大鼠甲状腺上皮细胞完全培养基 100mL
AML-12小鼠正常肝细胞 Normal liver cells of AML-12 mice DMEM+10%FBS
EGF Protein Mouse 重组小鼠 EGF / Epidermal Growth Factor 蛋白 (Fc 标签)
SMC-1(人胸膜瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 胃黏膜上皮Many types of cells包装:5 × 105次方(1ml)
STK40 Others Human 人 STK40 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)
人胚胎眼巩膜成纤维细胞;HFSF
CL-0274EJ(人膀胱癌细胞)5×106cells/瓶×2
293T, SV40转化的人胚肾上皮细胞系 小鼠原B细胞,BA/F3细胞 Hs 181.Tes(正常人细胞)
人肺粘液上皮样癌细胞;NCI-H292
MET Others Human 人 c-MET / HGFR 人细胞裂解液 (阳性对照)
大鼠胎盘生长因子(PLGF)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人褪黑素(MT)免疫试剂盒 Human Melatonin,MT ELISA Kit
糖原含量测试盒 可见分光光度法 50管/48样
RatSolubleIntercellularAdhesionMolecule1,sICAM-1ELISA试剂盒大鼠可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)ELISA试剂盒规格:96T/48T
HumanIntestinaltrefoilfactor,ITFELISA试剂盒人肠三叶因子(ITF)ELISA试剂盒规格:96T/48T
HumanMyosinlightChain,MLCELISAKit人肌球蛋白轻链(MLC)ELISA试剂盒规格:96T/48T
兔子端粒酶(TE)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Human Trichinella antibody (Trichinella Ab) ELISA Kit 人旋毛虫抗体(Trichinella Ab)ELISA试剂盒
Humananti-lymphocytotoxicantibody,ALA/LCAELISAKit 人抗淋巴细胞毒抗体(ALA/LCA)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
HumanEpidermalgrowthfactor,EGFELISA试剂盒人表皮生长因子(EGF)ELISA试剂盒规格:96T/48T
组织PLK3激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次
HumanPancreaticAmylase,PAMYELISAKit人胰淀粉酶(PAMY)ELISA试剂盒规格:96T/48T
ROS活性氧YZ剂 / ROS清除剂10ml使用说明书人白介素21(IL-21)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人白介素2(IL-2)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人白介素1受体拮抗剂(IL1Ra)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人白介素1可溶性受体Ⅱ(IL-1sRⅡ)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
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