甲苯胺蓝染色液（0.5%,硼酸盐法）100ml实验方法

甲苯胺蓝染色液(0.5%,硼酸盐法)100ml实验方法使用注意事项
1．微量试剂取用前请离心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD为潜在致癌物，操作时请采取防护措施，穿防护服、戴手套等。
4．本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，，不推荐用于检测组织样本。
甲苯胺蓝染色液(0.5%,硼酸盐法)100ml实验方法操作方法
1．悬浮细胞离心（2000rpm离心5min）收集；贴壁细胞用胰酶消化收集用PBS洗涤细胞二次（2000rpm离心5min）收集1~5×105细胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混匀；室温、避光、反应5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer悬浮细胞；
4．请在1 hour内，进行下述荧光显微镜或流式细胞仪的观察和检测。
A．荧光显微镜观察
1．滴一滴上述染色后的细胞悬液于载玻片上，并用盖玻片盖上细胞；
2．对于贴壁细胞来说，也可直接用盖玻片来培养细胞并诱导细胞凋亡；
（1）将细胞于盖玻片上生长，用适当的凋亡诱导剂诱导细胞凋亡，并设立阴性对照组；
（2）用PBS洗涤细胞两次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混匀；
（4）将上述溶液滴加于盖玻片表面，使长有细胞的盖玻片表面均匀覆盖；
（5）避光、室温反应5 min。
3．将盖玻片倒置于载玻片上，于荧光显微镜下观察激发波长546nm，发射波长647 nm，7-AAD荧光信号呈红色。
B．流式细胞仪分析
用流式细胞仪检测，激发波长Ex=546 nm; 发射波长Em=647 nm。
7-AAD红色荧光建议使用FL3通道检测。
甲苯胺蓝染色液(0.5%,硼酸盐法)100ml实验方法实验步骤
贴壁细胞需用0.25%的胰酶消化。注意过度消化可损伤细胞。在消化时可加2％的BSA可防止消化过度。如果用含EDTA的胰酶消化时，注意必须彻底清除EDTA：在标记前用1×PBS或1×bindingbuffer洗涤，清除EDTA，以免残余的EDTA与Ca2＋螯合，影响Annexin V的结合。
（1）用去离子水将10×Binding Buffer稀释成1×Binding Buffer；
（2）细胞收集。悬浮细胞收集：离心5分钟；贴壁细胞：用不含EDTA的胰酶消化收集后（注：胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-FITC的结合），于室温2000rpm离心5～10分钟，收集细胞；
（3）细胞洗涤：用预冷1×PBS（4℃）重悬细胞一次，2000rpm离心5～10分钟，洗涤细胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 悬浮细胞；
（5）Annexin V-FITC标记：加入5μL的Annexin V-FITC混匀后，避光，室温孵育15分钟；
（6）PI标记：上机前5分钟再加入5μL的PI染色。
（7）上机前，补加200μL的1×Binding Buffer。
SK-OV-3(人卵巢癌细胞) 5×106cells/瓶×2

大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞;PC-12 [PC12]

EFNB2A Others Danio rerio (zebrafish) 斑马鱼 EFNB2A / Ephrin B2a 人细胞裂解液 (阳性对照)

MRC-5细胞，人胚肺细胞 大鼠肺上皮Ⅱ型细胞,RLE-6TN细胞 T-109B弹性蛋白酶(含100mL酶解缓冲液)10mL

导管上皮细胞Many types of cells包装：5 × 105次方(1ml)

HUVEC-c Growth Medium 2 pooled 500,000cells 肺大静脉平滑肌细胞Many types of cells包装：5 × 105次方(1ml)
CM-R087大鼠软骨细胞完全培养基100mL

HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Pigeon/Shanghai/S1069/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)

小鼠海马趾星形胶质细胞MA-h

猴肾细胞;Vero IgCD4 人巨核细胞白血病，CHRF细胞 SK-N-MC(神经上皮瘤细胞)

EB病毒转化的人B淋巴细胞;KMY0928

GFRA2 Others Mouse 小鼠 GFRA2 / GFRα2 / GDNFRB 人细胞裂解液 (阳性对照)
人成纤维细胞(HMF)(5×105)

人骨肉瘤细胞;HOS

CM-H112人脂肪细胞完全培养基100mL

小鼠浆细胞瘤;MPC-11 小鼠直肠平滑肌细胞完全培养基 100mL

rEPC，大鼠内皮祖细胞- Rattus

EPHA6 Others Mouse 小鼠 EPHA6 / EHK-2 人细胞裂解液 (阳性对照)
小鼠基质金属蛋白酶19(MMP19)ELISA试剂盒 ，英文名： MMP19 ELISA Kit

人腺苷脱氨酶(ADA)ELISA检测试剂盒Humanadenosinedeaminase,ADAELISAKit 96T/48T

大鼠纤连蛋白(FN)免疫试剂盒 Rat Fibronectin,FN ELISA Kit

英文名称RatangiotensionIELISAKit大鼠血管紧张素I(AngI)规格：96T/48T

果菜类植酸比色法定量检测试剂盒20次

ELISAKiongin人延伸蛋白规格：48T/96T
小鼠β甘露糖苷酶(β Manase)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

Human vitamin C (VC) ELISA Kit 人维生素C(VC)ELISA试剂盒

Humancalmodulin,CAMELISAKit 人钙调素(CAM)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanchemerinELISA试剂盒人chemerinELISA试剂盒规格：96T/48T

转基因玉米NK603品系基因检测试剂盒20次

Humanserineprotease，PRSSELISAKit人丝氨酸蛋白酶(PRSS)ELISA试剂盒规格：96T/48T
甲苯胺蓝染色液(0.5%,硼酸盐法)100ml实验方法人上腺素能a1A受体(ADRA1A)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

人上腺素(EPI)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

人上腺皮质抗体(ACA)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

人病蛋白(nephrin)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装