乳酸酚棉蓝染色液100ml使用说明书实验操作步骤:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量为 1mL ,其他培养器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此类推;对于细胞悬液每50~100 万细胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取适量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超纯水的比例稀释JC-1 。剧烈震荡充分溶解并混匀 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色缓冲液(5 ×),混匀后即为 JC-1 染色工作液。
2、阳性对照的设置:
把试剂盒中提供的CCCP(10mM )推荐按照1 ∶1000 的比例加入到细胞培养液中,稀释至10uM ,处理细胞 20 分钟。随后按照下述方法装载 JC-1 ,进行线粒体膜电位的检测。对于大多数细胞,通常10uM CCCP处理 20 分钟后线粒体的膜电位会完全丧失,JC-1 染色后观察应呈绿色荧光;而正常的细胞经JC-1 染色后应显示红色荧光。对于特定的细胞,CCCP 的作用浓度和作用时间可能有所不同,需自行参考相关文献资料决定。
3、对于悬浮细胞:
(1)取 10~60 万细胞,重悬于 0.5mL 细胞培养液中,细胞培养液中可以含血清和酚红。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,颠倒数次混匀。细胞培养箱中 37 ℃孵育20 分钟。
(3)在孵育期间,按照每 1mL JC-1 染色缓冲液(5×)加入 4mL 蒸馏水的比例,配制适量的JC-1 染色缓冲液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育结束后,600g 4 ℃离心3 ~4 分钟,沉淀细胞。弃上清,注意尽量不要吸除细胞。
(5)用JC-1 染色缓冲液(1×)洗涤 2 次:加入 1mL JC-1 染色缓冲液(1×)重悬细胞,600g 4 ℃离心3~4 分钟,沉淀细胞,弃上清。再加入 1mL JC-1 染色缓冲液(1×)重悬细胞,600g 4 ℃离心 3~4 分钟,沉淀细胞,弃上清。
(6)再用适量 JC-1 染色缓冲液(1×)重悬后,用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察,也可以用荧光分光光度计检测或流式细胞仪分析。
乳酸酚棉蓝染色液100ml使用说明书注意事项
(1)本试剂只适用于实验,不适用于临床检测;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙锭)有毒性,能通过皮肤吸收,对眼睛有刺激作用,使用时需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。在处理和标记时,尽可能在暗处进行。在孵育阶段,用铝箔包裹容器或置于抽屉中。细胞标记后,在暗室内用显微镜观察;
(4)整个操作过程动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞,尽量在4℃下操作,以免影响细胞状态。
(5)在细胞洗涤的zui后一步,请尽量将上清弃净,以免PBS残留,有可能会影响实验结果。
(6)为防止荧光衰变,宜在1小时内进行流式检测。
(7)PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,建议首先进行Annexin V-FITC染色,zui短可在上机前5分钟再加入PI染色。
S-180(小鼠肉瘤细胞) 5×106cells/瓶×2
大耳山羊肾细胞;LDG-2
IFNA8 Others Human 人 Interferon alpha-B / IFNA8 人细胞裂解液 (阳性对照)
A549/DDP细胞,耐DDP肺癌细胞 ZG仓鼠肺细胞,CHL细胞 CM-M002小鼠肺血管平滑肌细胞完全培养基100mL
人SF基质细胞HHGMC
Gibco 10639011 STEM PRO-34- COMBO 500ml
CM-R116大鼠视网膜色素上皮细胞完全培养基100mL
HA Others H9N2 甲型流感 H9N2 (A/Chicken/Hong Kong/G9/97) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人细胞裂解液 (阳性对照)
小鼠肾成纤维细胞完全培养基 100mL
P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1]小鼠瘤细胞 P3/NSI/1-Ag4-1 mouse myeloma cell line [NS-1] DMEM培养基+10%FBS
IL12A & IL12B Protein Mouse 重组小鼠 IL-12 (IL12A & IL12B Heterodimer) 蛋白
UACC-812(人导管瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 EB-3 [EB3](人淋巴样Burkitt淋巴瘤细胞)
IFNB1 Others Mouse 小鼠 IFNB1 / IFN-beta / Interferon beta 人细胞裂解液 (阳性对照)
人细胞;Hela 229 [HeLa229]
CRT 神经胶质瘤细胞
MHCC-97H人肝癌细胞(高转移) MHCC-97H human hepatoma cells (high transfer) DMEM+10%FBS
TNFSF8 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD153 / CD30L / TNFSF8 蛋白 (His 标签)
人晶状体上皮细胞 (HLEpiC)( 5×105 ) HUVEC-12, 人脐静脉血管内皮细胞系 Human
小鼠含血管性血友病因子A域蛋白1(vWA1)ELISA试剂盒 ,英文名: vWA1 ELISA Kit
人协同刺激分子受体(CMR)ELISA检测试剂盒Humancostimulatorymoleculesrecptor,CMRELISAKit 96T/48T
大鼠透明质酸结合蛋白(HABP)免疫试剂盒 Rat Hya]uronate binding protein,HABP ELISA Kit
英文名称RatHbA1cELISAKit大鼠糖化血红蛋白(HbA1c)规格:96T/48T
化学发光免疫印迹消除试剂盒20次
ELISAKitVEGF-D人血管内皮细胞生长因子D规格:48T/96T
小鼠基脲敏感性胺氧化酶(SSAO)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Human advanced oxidation protein products (AOPP) ELISA Kit 人晚期氧化蛋白产物(AOPP)ELISA试剂盒
Humanbonesialoprotein,BSPELISAKit 人骨涎蛋白(BSP)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
HumanCathepsinAntibodies,CathAbELISA试剂盒人组织蛋白酶抗体(CathAb)ELISA试剂盒规格:96T/48T
转基因油菜(canola)MS8品系基因检测试剂盒20次
humansimilartoRIKENcDNA2010109K09geneELISAKit人类似RIKENcDNA2010109K09基因ELISA试剂盒规格:96T/48T
乳酸酚棉蓝染色液100ml使用说明书人肽基脯酰顺反异构酶(PPI)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人胎球蛋白A(FETU-A)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人胎盘生长因子(PLGF)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人胎盘泌乳素(PL)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
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