Mallory磷钨酸苏木素染色试剂盒（PTAH化学氧化法）300ml实验方法

Mallory磷钨酸苏木素染色试剂盒(PTAH化学氧化法)300ml实验方法使用注意事项
1．微量试剂取用前请离心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD为潜在致癌物，操作时请采取防护措施，穿防护服、戴手套等。
4．本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，，不推荐用于检测组织样本。
Mallory磷钨酸苏木素染色试剂盒(PTAH化学氧化法)300ml实验方法操作方法
1．悬浮细胞离心（2000rpm离心5min）收集；贴壁细胞用胰酶消化收集用PBS洗涤细胞二次（2000rpm离心5min）收集1~5×105细胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混匀；室温、避光、反应5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer悬浮细胞；
4．请在1 hour内，进行下述荧光显微镜或流式细胞仪的观察和检测。
A．荧光显微镜观察
1．滴一滴上述染色后的细胞悬液于载玻片上，并用盖玻片盖上细胞；
2．对于贴壁细胞来说，也可直接用盖玻片来培养细胞并诱导细胞凋亡；
（1）将细胞于盖玻片上生长，用适当的凋亡诱导剂诱导细胞凋亡，并设立阴性对照组；
（2）用PBS洗涤细胞两次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混匀；
（4）将上述溶液滴加于盖玻片表面，使长有细胞的盖玻片表面均匀覆盖；
（5）避光、室温反应5 min。
3．将盖玻片倒置于载玻片上，于荧光显微镜下观察激发波长546nm，发射波长647 nm，7-AAD荧光信号呈红色。
B．流式细胞仪分析
用流式细胞仪检测，激发波长Ex=546 nm; 发射波长Em=647 nm。
7-AAD红色荧光建议使用FL3通道检测。
Mallory磷钨酸苏木素染色试剂盒(PTAH化学氧化法)300ml实验方法实验步骤
贴壁细胞需用0.25%的胰酶消化。注意过度消化可损伤细胞。在消化时可加2％的BSA可防止消化过度。如果用含EDTA的胰酶消化时，注意必须彻底清除EDTA：在标记前用1×PBS或1×bindingbuffer洗涤，清除EDTA，以免残余的EDTA与Ca2＋螯合，影响Annexin V的结合。
（1）用去离子水将10×Binding Buffer稀释成1×Binding Buffer；
（2）细胞收集。悬浮细胞收集：离心5分钟；贴壁细胞：用不含EDTA的胰酶消化收集后（注：胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-FITC的结合），于室温2000rpm离心5～10分钟，收集细胞；
（3）细胞洗涤：用预冷1×PBS（4℃）重悬细胞一次，2000rpm离心5～10分钟，洗涤细胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 悬浮细胞；
（5）Annexin V-FITC标记：加入5μL的Annexin V-FITC混匀后，避光，室温孵育15分钟；
（6）PI标记：上机前5分钟再加入5μL的PI染色。
（7）上机前，补加200μL的1×Binding Buffer。
Neuro-2a/N2a(小鼠脑神经瘤细胞) 5×106cells/瓶×2

EB病毒转化的人B淋巴细胞;KM9401

REG4 Others Human 人 REG4 / RELP / GISP 人细胞裂解液 (阳性对照)

HNE2细胞，人鼻咽癌细胞 小鼠淋巴瘤细胞,Yac-1细胞 CM-H014人气管平滑肌细胞完全培养基100mL

肝细胞培养基HM-prf

Promocell C-26011 Renal Epithelial Cell GrowthMedium KIT, 肾上皮细胞生长培养基套装 500ml
CM-H017人上皮细胞完全培养基100mL

ICOS Others Rat 大鼠 ICOS / AILIM / CD278 人细胞裂解液 (阳性对照)

主动脉内皮细胞Many types of cells包装：5 × 105次方(1ml)

NB4细胞，人急性早幼粒白血病细胞 绿色荧光蛋白标记小鼠前胃癌细胞,MFC-GFP细胞 成纤维细胞培养基FM-sf-prf

MS751(人子宫颈表皮癌细胞) 5×106cells/瓶×2

BEL-7402(人肝癌细胞) 5×106cells/瓶×2 CM-R123大鼠角膜成纤维细胞完全培养基100mL 人细胞;Hela
GFRA1 Others Canine 狗 GFRA1 / GFR alpha-1 人细胞裂解液 (阳性对照)

人肺细胞;HLF-a

恒河猴肾细胞;MMK3

Ls-174-T细胞，人结肠癌细胞 人黑色素瘤细胞,SK23细胞 人细胞;Hela

HCCC-9810(人肝内胆管癌细胞) 5×106cells/瓶×2

APP Others Human 人 APP / Protease nexin-II 人细胞裂解液 (阳性对照)
大鼠乙酰胆碱转移酶(CHAT)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

人信号识别颗粒抗体(SRP)免疫试剂盒 Human signal recognization particle antibody,SRP ELISA Kit

柠檬酸合酶(CS)测试盒 可见分光光度法 10管/9样

Ratmacrophageinflammatoryprotein1α,MIP-1αELISA试剂盒大鼠巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA试剂盒规格：96T/48T

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小鼠白三烯B4(LTB4)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

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中量真菌/酵母细胞基因组DNA纯化试剂盒10次

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