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Caspase 3 活性检测试剂盒-荧光100T使用说明书实验操作步骤:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量为 1mL ,其他培养器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此类推;对于细胞悬液每50~100 万细胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取适量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超纯水的比例稀释JC-1 。剧烈震荡充分溶解并混匀 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色缓冲液(5 ×),混匀后即为 JC-1 染色工作液。
2、阳性对照的设置:
把试剂盒中提供的CCCP(10mM )推荐按照1 ∶1000 的比例加入到细胞培养液中,稀释至10uM ,处理细胞 20 分钟。随后按照下述方法装载 JC-1 ,进行线粒体膜电位的检测。对于大多数细胞,通常10uM CCCP处理 20 分钟后线粒体的膜电位会完全丧失,JC-1 染色后观察应呈绿色荧光;而正常的细胞经JC-1 染色后应显示红色荧光。对于特定的细胞,CCCP 的作用浓度和作用时间可能有所不同,需自行参考相关文献资料决定。
3、对于悬浮细胞:
(1)取 10~60 万细胞,重悬于 0.5mL 细胞培养液中,细胞培养液中可以含血清和酚红。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,颠倒数次混匀。细胞培养箱中 37 ℃孵育20 分钟。
(3)在孵育期间,按照每 1mL JC-1 染色缓冲液(5×)加入 4mL 蒸馏水的比例,配制适量的JC-1 染色缓冲液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育结束后,600g 4 ℃离心3 ~4 分钟,沉淀细胞。弃上清,注意尽量不要吸除细胞。
(5)用JC-1 染色缓冲液(1×)洗涤 2 次:加入 1mL JC-1 染色缓冲液(1×)重悬细胞,600g 4 ℃离心3~4 分钟,沉淀细胞,弃上清。再加入 1mL JC-1 染色缓冲液(1×)重悬细胞,600g 4 ℃离心 3~4 分钟,沉淀细胞,弃上清。
(6)再用适量 JC-1 染色缓冲液(1×)重悬后,用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察,也可以用荧光分光光度计检测或流式细胞仪分析。
Caspase 3 活性检测试剂盒-荧光100T使用说明书注意事项
(1)本试剂只适用于实验,不适用于临床检测;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙锭)有毒性,能通过皮肤吸收,对眼睛有刺激作用,使用时需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。在处理和标记时,尽可能在暗处进行。在孵育阶段,用铝箔包裹容器或置于抽屉中。细胞标记后,在暗室内用显微镜观察;
(4)整个操作过程动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞,尽量在4℃下操作,以免影响细胞状态。
(5)在细胞洗涤的zui后一步,请尽量将上清弃净,以免PBS残留,有可能会影响实验结果。
(6)为防止荧光衰变,宜在1小时内进行流式检测。
(7)PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,建议首先进行Annexin V-FITC染色,zui短可在上机前5分钟再加入PI染色。
AAV-293(人胚肾细胞) 5×106cells/瓶×2
CL-0189Raji(人Burkitt's淋巴瘤细胞)5×106cells/瓶×2
ACVR2B Others Cynomolgus 食蟹猴 ACVR2B / ACTRIIB 人细胞裂解液 (阳性对照)
Jurknt. Clone E6-1细胞,白血病细胞 急性T淋巴细胞白血病细胞,TALL-104细胞 人导管癌细胞;CFPAC-1
婆罗门牛皮肤成纤维样细胞;BOS-3
PVRL2 Others Human 人 CD112 / Nectin-2 / PVRL2 人细胞裂解液 (阳性对照)
胰酶中和液TNS
IL1RL1 Others Mouse 小鼠 IL1RL1 / ST2 人细胞裂解液 (阳性对照)
人神经胶质细胞瘤细胞;U251
大鼠源细胞 Burkitt's 淋巴瘤细胞,NAMALWA细胞 LLC-MK2细胞,绿猴恒河猴肾细胞
Hela, 人细胞系 Human
ADIPOQ Others Mouse 小鼠 ADIPOQ / ACDC / Adiponectin 人细胞裂解液 (阳性对照)
CD70 Others Rat 大鼠 CD70 / CD27L / TNFSF7 人细胞裂解液 (阳性对照)
牛肾细胞;MDBK(BVDV-free)
人肺成纤维细胞完全培养基 100mL
OCM-1细胞,人眼脉络黑色素瘤细胞 绳状青霉 小鼠T淋巴细胞瘤细胞;Cyc-Tag(S49)
ANGPTL5 Protein Human 重组人 ANGPTL5 蛋白 (GST 标签)
Li-7(人肝癌细胞) 5×106cells/瓶×2 SARS冠状病毒 Spike S1 Subunit 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)
鹅睾酮(T)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人血纤肽/纤维蛋白肽B(FPB)免疫试剂盒 Human FPB ELISA Kit
人KJ肽(Att)ELISA试剂盒 ,英文名: Att ELISA Kit
RatInhibinbindingprotein,INHBPELISA试剂盒大鼠YZ素结合蛋白(INHBP)ELISA试剂盒规格:96T/48T
HumanFreeProstateSpecificAntigen,fPSAELISA试剂盒人游离前列腺特异性抗原(fPSA)ELISA试剂盒规格:96T/48T
Humanintercellularadhesionmolecule3,ICAM-3ELISAKit人细胞间粘附分子3(ICAM-3/CD50)ELISA试剂盒规格:96T/48T
小鼠红细胞生成素受体(EPOR)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Rat phospholipase A2 (PL-A2) ELISA Kit 大鼠磷脂酶A2(PL-A2)ELISA试剂盒
humandopamine,DAELISAKIT 人多巴胺(DA)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
HumanAnti-myocardialantibody,AMAELISA试剂盒人抗心肌抗体(AMA)ELISA试剂盒规格:96T/48T
植物染色质免疫沉淀分析(CHIP)试剂盒10次
HumanUltrasensitivityTri-iodothyronine,u-T3ELISAKit人高敏三碘甲状腺原氨酸(u-T3)ELISA试剂盒规格:96T/48T
Caspase 3 活性检测试剂盒-荧光100T使用说明书小鼠低密度脂蛋白(LDL)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
小鼠蛋白质二硫键异构酶(PDI)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
小鼠蛋白磷酸酯酶2B(PP-2B)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
小鼠蛋白磷酸酶(PP)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装