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封闭液(Western)100ml免费代测有效期:一年。
产品简介:
Western 封闭液用于Western 时转移了蛋白样品的PVDF 膜或NC 膜的封闭。封闭后,可以减小后续的一抗或二抗和膜的非特异性结合,降低背景,增强信噪比。按照每张膜封闭需要5-10 毫升封闭液计算,一个包装的Western 封闭液可以封闭10-20张膜。
封闭液(Western)100ml免费代测实验操作步骤:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量为 1mL ,其他培养器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此类推;对于细胞悬液每50~100 万细胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取适量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超纯水的比例稀释JC-1 。剧烈震荡充分溶解并混匀 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色缓冲液(5 ×),混匀后即为 JC-1 染色工作液。
2、阳性对照的设置:
把试剂盒中提供的CCCP(10mM )推荐按照1 ∶1000 的比例加入到细胞培养液中,稀释至10uM ,处理细胞 20 分钟。随后按照下述方法装载 JC-1 ,进行线粒体膜电位的检测。对于大多数细胞,通常10uM CCCP处理 20 分钟后线粒体的膜电位会完全丧失,JC-1 染色后观察应呈绿色荧光;而正常的细胞经JC-1 染色后应显示红色荧光。对于特定的细胞,CCCP 的作用浓度和作用时间可能有所不同,需自行参考相关文献资料决定。
3、对于悬浮细胞:
(1)取 10~60 万细胞,重悬于 0.5mL 细胞培养液中,细胞培养液中可以含血清和酚红。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,颠倒数次混匀。细胞培养箱中 37 ℃孵育20 分钟。
(3)在孵育期间,按照每 1mL JC-1 染色缓冲液(5×)加入 4mL 蒸馏水的比例,配制适量的JC-1 染色缓冲液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育结束后,600g 4 ℃离心3 ~4 分钟,沉淀细胞。弃上清,注意尽量不要吸除细胞。
(5)用JC-1 染色缓冲液(1×)洗涤 2 次:加入 1mL JC-1 染色缓冲液(1×)重悬细胞,600g 4 ℃离心3~4 分钟,沉淀细胞,弃上清。再加入 1mL JC-1 染色缓冲液(1×)重悬细胞,600g 4 ℃离心 3~4 分钟,沉淀细胞,弃上清。
(6)再用适量 JC-1 染色缓冲液(1×)重悬后,用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察,也可以用荧光分光光度计检测或流式细胞仪分析。
封闭液(Western)100ml免费代测注意事项
(1)本试剂只适用于实验,不适用于临床检测;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙锭)有毒性,能通过皮肤吸收,对眼睛有刺激作用,使用时需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。在处理和标记时,尽可能在暗处进行。在孵育阶段,用铝箔包裹容器或置于抽屉中。细胞标记后,在暗室内用显微镜观察;
(4)整个操作过程动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞,尽量在4℃下操作,以免影响细胞状态。
(5)在细胞洗涤的zui后一步,请尽量将上清弃净,以免PBS残留,有可能会影响实验结果。
(6)为防止荧光衰变,宜在1小时内进行流式检测。
(7)PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,建议首先进行Annexin V-FITC染色,zui短可在上机前5分钟再加入PI染色。
菖蒲Acorus calamus Tatarinoid A none 1229005-35-9 C12H16O5 ≥95%
薏苡速Coixqnolidq23-91-20mg
流心酸 Lipoic acid 62-46-4 20mg HPLC≥98% 用于含量测定
鉴别蒙脱石100860-200501常温,避光1000mg
当药醇苷 Swertianolin 23445-00-3 20mg HPLC≥98% 23445-00-3用于含量测定
264624-38-6 脱氧升麻烃标准品 20mg
酪醇;队羟基本醇;4-羟基本醇Tyrosol;p-xy7noxypxenyletxylalcohol;4-xy7noxybenzeneethanol201-94-0HPLC≥98%,20mg/支
Vibsanin C 叶含荚宁 C 74690-89-4
硫丙 标准品 CAS号:35400-43-2 250mg
盐酸白屈菜红碱 3895-92-9 HPLC≥98%;20mg 订购|咨询
塞来昔布相关物质A标准品 10mg
叶下珠Herba Phyllanthi Urinariae 柯里拉京 23094-69-1 C27H22O18 ≥98% 言酸本氧丙酚安;言酸异克舒令(I0900000
八录二丙迷标准品 巴安灵标准品 巴毒灵标准品
Carbachol卡巴胆碱标准品200mg卡巴胆碱标准品
告达亭苷元 38395-02-7 HPLC≥98%;20mg 订购|咨询
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