我司细胞膜/胞浆/核膜蛋白分步提取试剂盒50T实验方法本着标准*、质量*、服务*、信誉*的宗旨,为客户提供轻松便捷,安全可靠的网上采购模式!我们将竭诚为您服务,咨询!
细胞膜/胞浆/核膜蛋白分步提取试剂盒50T实验方法产品简介:
细胞膜蛋白/胞浆蛋白/核膜蛋白提取试剂盒适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织,如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中分步提取细胞膜蛋白/胞浆蛋白/细胞核膜蛋白/核内蛋白。提取过程简单方便,可在2 小时内完成。该试剂盒含有的蛋白酶YZ剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高纯度的蛋白提供了。本试剂盒含有的独特配方能够溶解细胞膜包括细胞质膜和核膜。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究。
细胞膜/胞浆/核膜蛋白分步提取试剂盒50T实验方法实验操作步骤:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量为 1mL ,其他培养器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此类推;对于细胞悬液每50~100 万细胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取适量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超纯水的比例稀释JC-1 。剧烈震荡充分溶解并混匀 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色缓冲液(5 ×),混匀后即为 JC-1 染色工作液。
2、阳性对照的设置:
把试剂盒中提供的CCCP(10mM )推荐按照1 ∶1000 的比例加入到细胞培养液中,稀释至10uM ,处理细胞 20 分钟。随后按照下述方法装载 JC-1 ,进行线粒体膜电位的检测。对于大多数细胞,通常10uM CCCP处理 20 分钟后线粒体的膜电位会完全丧失,JC-1 染色后观察应呈绿色荧光;而正常的细胞经JC-1 染色后应显示红色荧光。对于特定的细胞,CCCP 的作用浓度和作用时间可能有所不同,需自行参考相关文献资料决定。
3、对于悬浮细胞:
(1)取 10~60 万细胞,重悬于 0.5mL 细胞培养液中,细胞培养液中可以含血清和酚红。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,颠倒数次混匀。细胞培养箱中 37 ℃孵育20 分钟。
(3)在孵育期间,按照每 1mL JC-1 染色缓冲液(5×)加入 4mL 蒸馏水的比例,配制适量的JC-1 染色缓冲液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育结束后,600g 4 ℃离心3 ~4 分钟,沉淀细胞。弃上清,注意尽量不要吸除细胞。
(5)用JC-1 染色缓冲液(1×)洗涤 2 次:加入 1mL JC-1 染色缓冲液(1×)重悬细胞,600g 4 ℃离心3~4 分钟,沉淀细胞,弃上清。再加入 1mL JC-1 染色缓冲液(1×)重悬细胞,600g 4 ℃离心 3~4 分钟,沉淀细胞,弃上清。
(6)再用适量 JC-1 染色缓冲液(1×)重悬后,用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察,也可以用荧光分光光度计检测或流式细胞仪分析。
细胞膜/胞浆/核膜蛋白分步提取试剂盒50T实验方法注意事项
(1)本试剂只适用于实验,不适用于临床检测;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙锭)有毒性,能通过皮肤吸收,对眼睛有刺激作用,使用时需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。在处理和标记时,尽可能在暗处进行。在孵育阶段,用铝箔包裹容器或置于抽屉中。细胞标记后,在暗室内用显微镜观察;
(4)整个操作过程动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞,尽量在4℃下操作,以免影响细胞状态。
(5)在细胞洗涤的zui后一步,请尽量将上清弃净,以免PBS残留,有可能会影响实验结果。
(6)为防止荧光衰变,宜在1小时内进行流式检测。
(7)PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,建议首先进行Annexin V-FITC染色,zui短可在上机前5分钟再加入PI染色。
金粟兰Chloranthus spicatus Sarcandrone A none 1190225-47-8 C33H30O8 ≥95%
异类叶升麻苷cctqosidqisomqr20mg/支
柴胡皂苷B2;柴胡皂甙B2 Saikosaponin B2 58316-41-9 20mg HPLC≥98% 用于含量测定
UV法含量测定坎地沙坦酯100685-200401常温,避光100mg
Budesonide布地奈德标准品51333-22-3200mg
16485-10-2 泛醇消旋体标准品 200mg
高良姜速;3,5,7-三羟基皇同Galangin;3,5,7-threexy7noxyflavone248-83-4HPLC≥98%,20mg/支
Prostephanaberrine PROSTEPHANABERRINE 105608-27-3
丙本磺隆 标准品 CAS号:181274-15-7 100mg
长春扶宁 162652-95-1 HPLC≥98%;20mg 订购|咨询
原人参二醇 Protopanaxdiol (≥98%,HPLC) 30636-90-9 20MG 标准品
余甘子Phyllanthus emblica (2R)-2-(乙酰氧基)-N-[(1S,2S,3R)-2,3-双(乙酰氧基)-1-[(乙酰氧基)甲基]十七烷基]二十四碳酰安 340702-68-3 C50H93NO9 ≥96% 扶录西林 杂质D
1-Deoxynojirimycin脱氧野尻霉素19130-96-21-脱氧野尻霉素5mg/支
Pravastatin wo7ium 普伐他汀钠标准品81131-70-6 50mg
角叶鞘柄木Toricellia angulata Cleomiscosin C 臭矢菜素C 84575-10-0 C21H20O9 ≥95%
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总巯基测试盒 可见分光光度法 50管/24样
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