人脐静脉内皮 (具有T24细胞特性) , ECV-304细胞5×10^5以上/1ml
对于大多数细胞研究工作者来说,人脐静脉内皮 (具有T24细胞特性) , ECV-304细胞污染那可是个糟糕的事情,也是比较容易出现的情况,我们如何防范,如何避免,是我们要学习和掌握的。
李氏增菌液LB2配套试剂 2×5支 2×5支
PALCAM琼脂基础 250g 250g
PALCAM琼脂配套试剂 10支 10支
德国无比色卡PH试纸 5.0→10.0 5米长/卷,200条/盒
人脐静脉内皮 (具有T24细胞特性) , ECV-304细胞德国PH试纸(单色) 40922 5米/卷
德国PH试纸(双色) 1.0-14.0 5米/卷
德国PH试纸(三色) 40919 5米/卷
物料表面检测PH指示剂 4.0-10.0 100ml/瓶
德国颜色溶液中检测PH测试条 40922 200条/盒
下面我们对细胞培养中常见的污染情况,做个总结:
1)原虫:培养液可轻微浑浊,显微镜下那些细小的点状物数量非常多,轻微活动,细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢,而且细胞状态不好,边缘不清楚,细胞不透亮。他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养。这种共生是非常普遍的,但他们的数量小,细胞站优势所以不会影响到细胞的正常生长,只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长,zui终形成恶性循环。
2)霉菌:培养液是清亮的,倒置显微镜下无杂质,37度孵箱培养2-3天,仍清亮,但出现絮状杂质,镜下可见呈细丝状的团状漂浮物,可看到明显的菌丝,细胞仍可生长,但时间长之后,细胞的活力状态变差,用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内,再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。CO2孵箱被霉菌污染后,可把所有细胞暂时转移,采用过氧乙酸擦洗孵箱(包括隔板,箱壁)。并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时,使其蒸汽弥漫。待过氧乙酸的气味消散后,再移入细胞。孵箱应定期清洁(2月左右),尤其在多雨的季节。其它培养箱清洗方法是:用84液擦洗-清水擦洗-75%酒精擦洗-紫外灯照。预防霉菌污染,可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制霉菌素或放线菌素D或双抗;但细胞一旦污染,很难挽救,制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补,建议舍弃该污染细胞。,将环境彻底消毒,如果所有细胞都污染,可能是系统污染,检查一下培养基和器材,如果只是个别污染,可能是操作问题,就要注意操作。
3)细菌:细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状,根据感染细菌的不同,可有不同的外形,培养液一般会浑浊变黄,对细胞生长影响明显。仔细检查一下器皿的灭菌情况,是否在高压灭菌时放气时间足够,压力足够!尤其是和储存培养液接触的移液管等物品,连续两次污染的话有可能造成储存液污染,一定要注意!下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象! 可在培养液中加相应的抗生素处理
4)黑蛟虫:可以穿透滤膜,也可以通过空气传播,低倍下为黑色点状,高倍下可看见黑色的小虫游来游去,培养液也是不浑的,一般不会太影响,细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良好,且观测到的运动物无明显增多,且培养液颜色、透明度无明显变化,可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。对细胞生长状态不会有明显影响,在细胞增殖旺盛之后会自然消失,除更换血清外无须特殊处理。建议如果细胞有可能是此种污染的话,可以增加细胞的种板密度,以提高细胞的生存率。
5)真菌:一般培养液清亮,不变色,镜下有丝状物,有些真菌开始很像死细胞碎片,只是它很多很多的小块很清楚,象珊瑚状,不象细胞碎片分不清,慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢,不象细菌那么容易被发现,但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了,也很难救活了。
6)支原体:黑色的,好象多为多形,培养液一般培养液一般会浑浊,原体感染,国内血清很多都没有做支原体阴性检测,而支原体是牛血清中zui常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后,细胞病变不很明显,只是慢慢死去。用泰乐菌素,兽用支原体病的药,但可用于细胞培养,无任何不良反应。Sigma公司的使用时用50ug/ml Tylosin培养液培养6天或连续传两代即可清除支原体污染。如果作为常用的抗生素的话, 建议用8ug/ml的浓度。
污染的可能原因:可能原因很多比如配液消毒问题、操作问题、环境问题等等关于培养基的无菌状况,取培养基至培养瓶中(不加细胞),37度试培养一段时间后观察。如果没有细菌生长就是操作的问题。 也可以在培养基中事先加入双抗(硫酸链霉素和氨苄青霉素)。但双抗有时会影响细胞的状态,所以在做转染、检测细胞某项指标前一定要撤去双抗,以避免影响实验结果。1、孵箱应定期用三氧机消毒或者 紫外光照射,并用酒精和新洁尔灭试擦孵箱同时孵箱内的水应是三蒸水2、超净台\取材\器材\培养液\培养瓶\操作等因素3、超净台的风机不能过大,风机到6-8格。否则也可能能致霉菌污染4、无菌室经甲醛熏蒸消毒后,可用同等量的氨水喷洒中和,约几小时即可进入操作。
嗜盐菌选择性琼脂 250 用于副溶血性弧菌的选择性分离培养(GB标准)
氯化钠血琼脂基础 250 用于副溶血性弧菌的溶血试验(GB标准)
霍乱双糖铁琼脂(KIA) 250 用于霍乱弧菌的生化试验(SN标准)
T1N1 琼脂 250 用于霍乱弧菌的培养(SN标准)
T1N0 肉汤 250 用于霍乱弧菌的生长试验(SN标准)
T1N3 肉汤 250 用于霍乱弧菌的生长试验(SN标准)
精氨酸葡萄糖斜面琼脂 100 用于霍乱弧菌的复合生化试验(SN标准)
精氨酸双水解实验用培养基(AD) 5g 生化培养基,用于弧菌的精氨酸试验
mCPC培养基 250g 用于弧菌分离培养(FDA标准)
mCPC培养基添加剂 1ml*5 每瓶添加于100mlmCPC培养基中
副溶血性弧菌琼脂 250g 用于副溶血性弧菌的选择性分离培养
副溶血性弧菌增菌液 250g 用于副溶血性弧菌的增菌培养
大肠杆菌显色培养基 1000(ML) 用于快速、准确检测大肠杆菌大肠杆菌培养24小时,显兰色
大肠菌群显色培养基 1000(ML) 用于快速、准确检测大肠菌群大肠菌群培养24小时,显兰色
大肠杆菌/大肠菌群显色培养基 1000(ML) 用于快速、准确同时检测大肠杆菌和大肠菌群,培养24小时,大肠杆菌显紫色,大肠菌群显红色
大肠杆菌/大肠菌群显色培养基 9CM平皿 用于快速、准确同时检测大肠杆菌和大肠菌群,培养24小时,大肠杆菌显紫色,大肠菌群显红色
TBX 培养基 1000(ML) 用于快速、准确检测大肠菌群大肠菌群培养24小时,显兰色
细菌总数显色培养基 250g 用于快速、准确检测细菌总数,培养24小时,细菌显红色
O157显色培养基 1000(ML) 用于O157菌的显色培养
沙门氏菌显色培养基 1000(ML) 用于沙门氏菌的显色培养
李氏菌显色培养基 1000(ML) 用于李氏菌的显色培养
金黄色葡萄球显色培养基 1000(ML) 用于金黄色葡萄球菌的显色培养
霉菌和酵母菌显色培养基 1000(ML) 用于霉菌和酵母菌的显色培养
弧菌显色培养基 1000(ML) 用于弧菌的显色培养,副溶血性弧菌显蓝色,其它弧菌显无色
坂崎杆菌显色培养基 1000(ML) 用于坂崎杆菌的显色培养基,坂崎杆菌显蓝色,其他肠杆菌显无色
尿道定位显色培养基 1000(ML) 用于分离和鉴别常见尿道致病菌
平板计数琼脂培养基(含糖琼脂PCA) BR 250g BR 250g
煌绿乳糖胆盐肉汤培养基(BGLB) BR 250g BR 250g
结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA) BR 250g BR 250g
缓冲蛋白胨水(BP)培养基 BR 250g BR 250g
李氏增菌液LB1配套试剂 2×5支 2×5支
HE琼脂培养基 BR 250g BR 250g
木糖-赖氨酸-去氧胆酸盐琼脂(XLD) 250g 250g
胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂(TSA-YE) BR 250g BR 250g
胰酪胨大豆酵母浸膏肉汤(TSB-YE)(EB增菌液基础) BR 250g BR 250g
李氏菌增菌汤(LB1,LB2)基础 BR 250g BR 250g
李氏增菌液LB1配套试剂 2×5支 2×5支