SuperScript® III 反转录酶 (RT) (SuperScript® III Reverse Transcriptase (RT)) 是 SuperScript® II RT 的专有突变体,在 50°C 具有活性,半衰期为 220 分钟,使用基因特异性引物 (GSP) 提高特异性,在所有 RT 中 cDNA 产量ZG。 如果要进行特定基因的 RT-PCR 或从总 RNA 或 poly (A)+ RNA 样品生成 cDNA,该产品十分理想。 和 SuperScript® II 一样,它可以从单链 RNA、DNA 或 RNA:DNA 杂合体合成互补 DNA链。 通过引入点突变对 SuperScript® III RT 进行遗传改造,这些点突变可以增加半衰期、降低 RNase 活性并增加热稳定性。 进行结构修饰后: - 50°C 时半衰期为 220 分钟,获得ZG的 cDNA 产量(图 1)
- RNase H 活性降低,获得更多全长 cDNA
- 在 50°C 有ZD活性,用 GSP 增加特异性
- 能增加 RT 单位而不YZ后续的 PCR
应用: DY链 cDNA 合成、阵列标记、cDNA 文库、RT-PCR、引物延伸和 3´ 和 5´ RACE。 来源: 纯化自表达 M-MLV 的 pol 基因的大肠杆菌 (1,2),通过突变增加了热稳定性和半衰期,降低了RNase H 活性。 性能和质量测试: SDS-PAGE 纯度;脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶分析(图 2)及 cDNA 产物的产量和长度。 单位定义: 一个单位的 SuperScript® III RT 是在 37°C 的反应体系中,使用 poly(A)•oligo(dT)12-18作为模板•引物,在 10 分钟内将 1 纳摩尔脱氧核糖核苷酸掺入酸沉淀材料所需的酶量 (3)。 单位反应条件: 50 mM Tris-HCl (pH 8.3)、40 mM KCl、6 mM MgCl 2、1 mM DTT。 0.5 mM [ 3 H]dTTP、0.1 mM poly(A)、0.1 mM oligo(dT)12-18、0.1 mg/ml BSA 和酶,共 50 µl,温度 37°C,时间 10分钟。 详细说明 常用规格 Optimal Reaction Temperature: | 50° C | Final Product Size(s): | 12.3 kb or less | Ribonuclease H Activity: | Reduced | Concentration: | 200 units/µl | Form: | Frozen | Format: | Tube(s) | Template: | ssRNA | Sensitivity: | Medium | Product Size: | 10,000 units | Enzyme Function: | RNA dependent DNA Polymerase | Number of Reactions: | 50 Reactions | Regulatory Statement: | For Research Use Only. Not for any animal or human therapeutic or diagnostic use. | 内容和储存 SuperScript® III Reverse Transcriptase is supplied with a vial of 5X first-strand buffer [250 mM Tris-HCl (pH 8.3), 375 mM KCl, 15 mM MgCl2], and a vial of 100 mM DTT. Store at -20°C. Guaranteed stable for 6 months when properly stored. |