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轴突相关CNTP2蛋白抗体(少突胶质细胞)铁蛋白-抗体交联法
⑴ 以0.3Mol/L pH 9.5硼酸盐缓冲液将铁蛋白稀释成20mg/ml~25mg/ml。
⑵ 以1︰1000(W/W)的比例加入XC液室温搅拌45min,离心去沉淀。
⑶ 以0.3Mol/L pH 9.5硼酸盐缓冲液将提纯lgG配成5mg/ml,以1︰4的比例(V/V)加入IgG与铁蛋白-XC液,4℃搅拌48h。
⑷ 以0.1Mol/L碳酸铵溶液透析过夜,以除去多余的异氰酸盐,再以0.05Mol/l pH 7.5 PBS透析,使pH值恢复到生理水平。
⑸ 超速离心 以1.00×105g离心5h,去上清,沉淀以0.05Mol/L PBS悬浮,再次离心,以除去未结合的IgG。
⑹ 以血清学及免疫学方法测定结合抗体的特异性、免疫活性以及标记效应,如果操作步骤严格,结果是满意的。
铁蛋白-抗体结合物处理标本
(1)将标本以5%pH 7.2(4℃)PBS液固定40min~60min。
(2)用冷的PBS液洗涤,离心。
(3)如是组织块,则在解剖显微镜下切成更小块,放入试管中,加入铁蛋白-抗体结合物置室温20min,不时振荡,
(4)以冷PBS液洗涤三次,离心。
(5)沉淀以2.5%戊二醛固定20min,以PBS洗涤。
(6)再以锇酸固定,脱水包埋。
也可以先超薄切片,再进行铁蛋白-抗体结合物染色。
结果判定
在已知对照样品成立的前提下,凡是出现黑色的铁分子颗粒即表示抗原的存在,判定阳性(+),否则判为阴性(-)。
轴突相关CNTP2蛋白抗体(少突胶质细胞)抗体的主要功能:
抗体的主要功能是与抗原(包括外来的和自身的)相结合,从而有效地清除侵入机体内的微生物、寄生虫等异物,抗体(antibody)是一种应答抗原产生的、可与抗原特异性结合的蛋白质。每种抗体与特定的抗原决定基结合。这种结合可以使抗原失活,也可能无效但有时也会对机体造成病理性损害,如抗核抗体、抗双链DNA抗体、抗甲状腺球蛋白抗体等一些自身抗体的产生,对人体可造成危害。
储存温度:存在于血清、组织培养上清液或腹水中的抗体在-20℃下能够长期储存。低温存放不会损伤抗体活性。抗体的工作液通常储存于4℃中。此温度下,抗体的活性能稳定数月至数年亦不损失。抗体溶液不应反复冻融,因为反复冻融将导致部分抗体失活并产生不需要的蛋白—蛋白凝聚物。抗体的凝聚能导致活性丧失。这是由于抗原结合位点的空间构象被破坏,或由于产生的不溶物被离心或过滤而除去。冷凝蛋白类的抗体不能存放于4℃。因为在4℃下此类抗体会发生沉淀。一些鼠源性IgG3亚类的抗体有此特性。如果抗体在4℃下发生沉淀,就应该存放于室温下的叠氮钠溶液中。
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轴突相关CNTP2蛋白抗体(少突胶质细胞)规律:
(1)初次反应产生抗体:当抗原DY次进入机体时,需经一定的潜伏期才能产生抗体,且抗体产生的量也不多,在体内维持的时间也较短。
(2)再次反应产生抗体:当相同抗原第二次进入机体后,开始时,由于原有抗体中的一部分与再次进入的抗原结合,可使原有抗体量略为降低。随后,抗体效价迅速大量增加,可比初次反应产生的多几倍到几十倍,在体内留存的时间亦较长。
(3)回忆反应产生抗体:由抗原刺激机体产生的抗体,经过一定时间后可逐渐消失。此时若再次接触抗原,可使已消失的抗体快速上升。如再次刺激机体的抗原与初次相同,则称为特异性回忆反应;若与初次反应不同,则称为非特异性回忆反应。非特异性回忆反应引起的抗体的上升是暂时性的,短时间内即很快下降。
保存条件:Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.