原装进口人2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)ELISA Kit 现货ELISA试剂盒质量保证是一个复杂的过程,许多重要的环节都影响到检测的质量:
一、操作因素对ELISA结果的影响ELISA操作步骤复杂,操作不当将引起较大的误差。以下叙述各个步骤中的影响因素。
1.加样
2.温育
3.洗涤
4.显色
5.比色
二、灰区的设置通常情况下,ELISA定性实验以“阳性”和“阴性”来报告结果,两者间有一条分界线被称为“阳性判断值”(cut-off value,CO值),这是定性免疫测定结果报告的依据。
三、标本复查ELISA手工检测过程复杂,影响因素较多,即使室内质控在控,也可能因孔间差异而造成结果的差异,因此加大复查力度是保证结果准确性的可靠方法,比如对HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等项目的可疑、弱阳性标本及少见模式的检测结果进行复查。
四、结果判断和报告常用下列几种方法表示结果:
1.定性测定
2.半定量测定 结果一般以滴度表示。
3.定量测定 即用已知量的标准品作一系列稀释后进行ELISA测定,绘制标准曲线,结果以JD量或单位表示。在ELISA定量检测中每一块反应板都必须绘制相应的标准曲线。
4.结果报告
五、操作步骤:用于检测未知抗原的双抗体夹心法
1. 包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。
2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。
4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。5. 终止反应
6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
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