Co-IP(免疫沉淀)原理和过程:用一种抗体免疫沉淀富集蛋白质分子复合体,另外一种抗体检测另一个分子在免疫沉淀复合体内的表达,从而证实两个或多个分子之间是否存在相互作用。可以研究体外表达的重组蛋白分子之间、293细胞或Hela细胞过表达的分子之间、或内源性分子之间的相互作用。
样品:1. 客户需提供待检测样品、免疫沉淀用抗体及检测用抗体。
- 免疫共沉淀(co-IP)通常使用未经冻存的新鲜蛋白样品。
收费标准:3000元/实验,不包括一抗费用。
实验周期:2-3周提交实验报告
按照检测A分子和B分子的相互作用为例:1. A分子和B分子的抗体,其中,至少一个能做IP,由客户按需提供。
2. 处理好的细胞,一般做IP需要800ug-1000ug的蛋白,也就是需要长得很满的10cm培养皿2个,或细胞稍微稀一点的10cm培养皿3个。
3. 收集细胞:以贴壁细胞为例,吸去培养基,8-10ml的冷PBS(4度存放)洗2次培养皿,将细胞用细胞铲刮入1ml的冷PBS中,转入离心管,4度离心机,2500rpm离心5分钟,弃上清,留取细胞沉淀。-80度冻存。
4. 计费:先进行WB检测,如果蛋白表达量可以,抗体做WB好用,继续进行IP实验。如果蛋白表达较少,抗体不能进行WB,则收取WB费用(600元/半张膜),不进行IP实验;如样品内A和B分子表达较高,能进行IP实验,则不额外收取上述WB费用,IP实验收费为3000元。
5. IP实验成功判定标准为:使用IP抗体(A分子抗体),免疫沉淀得到了抗体识别的分子(A分子),不保证能够检测到相互作用分子(B分子)(因为影响相互作用的因素很多,甚至根本不相互作用);如果没有检测到相互作用分子(B分子),按照半价(1500元)收费。
技术项目 | 收费标准 |
1. 蛋白表达检测、相互作用检测 |
1.A. Western-blot检测 | 1200元/膜,10个加样孔,检测8个样品 |
1.B. 免疫组化(IHC)检测 | 组织蜡块包埋(10元/组织)、切片(10元/载玻片)、 抗体检测(60元/阳性片子) |
1.C. Co-IP(免疫沉淀) | 3000元/实验 |
1.D. ELISA | 800元/96孔 |
2. 分子生物学实验 | |
2.A. 原核、真核常规表达载体构建 | 2000元/载体 |
2.B. 慢病毒表达载体构建、病毒包装 | 4000元/载体构建+病毒包装 |
2.C. 慢病毒RNAi载体构建、病毒包装 | 4000元/载体构建+病毒包装 |
2.D. 定点突变、片段删除突变 | 2000元/定点突变,3000元/片段删除 |
2.E. 质粒、基因组DNA、RNA大量提取 | 价格面议 |
3. 细胞系建立、细胞功能实验 | |
3.A. 基因过表达稳定细胞系建立 | 4000元/细胞系 |
3.B. 基因敲低稳定细胞系建立 | 4000元/细胞系 |
3.C. CRISPR/Cas9系统基因敲除细胞系建立 | 20000元/细胞系 |
3.D. 细胞增殖实验(MTS法) | 800元/两种细胞系比较 |
3.E. Transwell细胞迁移 | 200元/well(小室) |
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