小鼠胰岛素瘤β细胞(NOD/Lt转基因小鼠,SV40巨T抗原),NIT-1细胞培养是生物学和医学研究Z常用的手段之一,可分为原代培养和传代培养两种。原代培养是直接从生物体获取细胞进行培养。由于细胞刚刚从活体组织分离出来,故更接近于生物体内的生活状态。这一方法可为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段,同时也为以后传代培养创造条件。利用此方法还可直接服务于临床实践。例如,用从手术中切除的肿瘤细胞进行原代培养,然后用该培养细胞进行药物的筛选,根据肿瘤细胞对加入的化疗药物的敏感性来帮助选择Z有效的化疗方案,有可能起到增强LX、降低副作用的作用。
小鼠胰岛素瘤β细胞(NOD/Lt转基因小鼠,SV40巨T抗原),NIT-1细胞培养方法,收到细胞后,在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况,如果细胞已长满(达80-90%)。
即可进行传代,具体步骤如下:
1,弃去培养液,用PBS洗1-2次。
2,向瓶内加入1.0-2.0ml胰蛋白酶液,在倒置显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆,迅速拿回操作台,吸取胰蛋白酶,加含有6ml 含10%血清的培养液,轻轻吹打细胞。
3,加入等量的的培养液,轻轻吹打混匀后吸出一半,分到新的培养
4,传代比例:1:2-1:3
小鼠胰岛素瘤β细胞(NOD/Lt转基因小鼠,SV40巨T抗原),NIT-1细胞注意事项:
1. 原代培养,一定要避免污染。
2. MEF生存能力有限,如果不冻存,体外存活十代左右。
3. 冻存后复苏的细胞只能传代一次,因为这些细胞繁殖能力有限。
4. 消化细胞时间不要过长。
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