我们采用的酶: | 辣根过氧化酶(HRP) |
1. HRP在蔬菜作物辣根中含量很高。 |
2. 是一种糖蛋白,含糖量约18%;分子量为44kD。 |
3. 是一种复合酶,由主酶(酶蛋白)和辅基(亚铁血红素)结合 而成的一种卟啉蛋白质。 |
4. 主酶为无色糖蛋白,在275nm波长处有吸收峰;辅基是深 棕色的含铁卟啉环,在403nm波长处有吸收峰。 |
HRP催化下列反应: |
DH2+H2O2<==HRP==>D+2H2O |
上式中DH2为供氢体,H2O2为受氢体。HRP对受氢体的专一 性很高,除H2O2外,仅作用于小分子醇的过氧化物和尿素的过 氧化物。后者为固体,作为试剂较H2O2方便。许多化合物可作 为HRP的供氢体,在ELISA中常用的供氢体底物为邻苯二胺(orthopenylenediamine,OPD)、四甲基联苯胺(3,3', 5,5'-tetramethylbenzidine,TMB)和ABTS[2,2'-azino- bis(3-ethyl-benzthiazolinesulfonate-6)]。 |
【注意事项】 |
1.包被板须密封防潮。从冷藏环境中取出时,应平衡至室温后,方可开封启用。未使用完的板条应即时放回有干燥剂的自封袋中,4℃密封保存。 |
2.滴加试剂前应将滴瓶轻摇、混匀,首滴弃去;滴加试剂时瓶身应保持竖直。 |
3.瓶盖每次使用后要盖紧,各瓶盖之间不可混用。不同批号试剂盒的试剂组份不可混用。 |
4.孵育时,推荐使用水浴箱。如无水浴箱,可取密封湿盒放入37℃温箱内使用。 |
5.用弃的试剂盒及样本都应按污染物妥善处理。试剂盒内终止液有腐蚀性,须小心使用。 |