CNE-2Z-LUC人鼻咽癌母系细胞-荧光素酶标记操作步骤:请收到细胞后,在倒置镜下(Z好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况。(一)如果细胞未长满,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,吸出培养液,换 10ml新鲜培养液后继续培养。(二) (二)如果细胞已长满,即可进行传代培养。具体步骤如下:1.弃去培养液,用PBS(不含钙,镁离子)洗1-2次。2.加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,倒放于37℃培养箱1-3分钟预热,之后翻转培养瓶10-30秒后,在倒置显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。3.按6-8ml/瓶补加完全培养基,轻轻打匀后吸出一半,分到新的培养瓶中。如果没有特别说明,收到细胞后的次传代一般是一传二。注:1、观察细胞Z好在低倍镜(4或5X物镜)下进行,否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X或20X物镜下。2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基,细胞冻存后,培养基中可不加任何抗生素。3、有些细胞贴壁不牢,如发现贴壁细胞有脱落,可离心吹打后接种到新瓶内。4、收到细胞后,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请及时与我们联系。