黄曲霉毒素检测试剂盒
【货号】
C11011/C12011![](http://item.yiqi.com/pic/ConPic/1/content11-32-19-98-169322.jpg)
【适用】
黄曲霉毒素检测试剂盒利用竞争酶联免疫吸附原理定量检测粮谷类,坚果类和饲料类样品中的黄曲霉毒素。
【检测原理】
黄曲霉毒素检测试剂盒以竞争性酶联免疫吸附检测法为基础。用甲醇/水震荡萃取粉碎样品中的黄曲霉毒素,过滤水相萃取物,然后进行免疫学检测。酶标抗原和标准或样品相继加入混合孔中,混匀后转移至测试孔,待黄曲霉毒素的抗体加入测试孔后反应开始。在10分钟的孵育过程中,样品及酶标记物中的黄曲霉毒素竞争结合连接在微孔上的抗体。然后倒掉孔中的溶液,洗掉微孔中未结合的黄曲霉毒素和酶标记物。加入无色的底物溶液,所有结合的酶标记物使底物转化成蓝色物质。8分钟孵育后,加入停止液然后根据测试孔中的颜色深浅读取吸光度值,未知浓度样品的吸光度值与标准品的吸光度值进行比较,就可以得到样品的黄曲霉毒素浓度。
【特异性】
黄曲霉毒素检测试剂盒不能区分各种黄曲霉毒素,但是能够不同程度的检测它们的存在,以下表格展示了其他黄曲霉毒素相对于毒素B1的交叉反应率。
| 复合物 | | 交叉反应率 |
| 黄曲霉毒素B2 | | 25% |
| 黄曲霉毒素G1 | | 25% |
| 黄曲霉毒素G2 | | 4% |
LOQ (定量限)
2ppb
【试剂及材料】
若试剂盒保存在2-8℃,未拆开包装的试剂盒在标识的保质期之前均可放心使用。
·
包被抗体的微孔板(Microtiter
Plate,测试孔)一块,真空包装带干燥剂
·
混合孔板(Mixing
Wells)一块
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5瓶浓度为0、2、4、12.5、50 ng/ml(ppb)的黄曲霉毒素标准品(Aflatoxin Standard)。(注意:因为谷物样品在萃取过程中1:5稀释,标准溶液实际上为设定标准浓度的1/5,所以原样品的浓度无需校正)
·
1瓶黄曲霉毒素酶标记物(Aflatoxin
Conjugate Solution)
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1瓶黄曲霉毒素抗体(Aflatoxin
Antibody Solution)
·
1瓶底物溶液(Substrate)
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1瓶停止液(Stop Solution)(注意:1N 盐酸,小心操作!)
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1瓶10倍浓缩清洗液(10×Wash
Solution)
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操作说明书
·
不同规格的试剂盒每种试剂对应体积如下:
| 货号 | | 规格 | | 标准 | | 酶标 | | 抗体 | | 底物 | | 停止液 | | 清洗液 |
| C11011 | | 96T | | 2ml | | 12ml | | 8ml | | 14ml | | 14ml | | 50ml |
| C12011 | | 48T | | 1ml | | 6ml | | 4ml | | 7ml | | 7ml | | 25ml |
【注意事项】
1.
每种试剂Z适用于CASCO 黄曲霉毒素试剂盒。其他生产商的试剂不可替代本试剂盒中的任何试剂,不同批次之间的试剂不可混用。
2.
被稀释或污染的试剂及程序中未提及的样品种类都会导致结果失真。
3.
不可使用过期试剂。
4.
开始实验前试剂需回温于室温(20-28℃),但避免试剂在室温存放过久(>24小时)。
5.
黄曲霉毒素为极毒物质,将所有丢弃的液体倒入盛有家用漂(不低于10%)的塑料容器中,所有的实验器具必须在30%家用漂溶液中浸泡至少1小时,戴上手套穿上防护服以避免皮肤及黏膜与试剂或样品萃取物接触,如果一旦接触,必须立即用大量水冲洗。
6.
停止液为1N 盐酸,避免皮肤及黏膜接触,如果有溅出,立即清除并用大量水冲洗。
【所需材料】
试剂盒中不提供
1. 感量0.01g的电子天平,小型粉碎机或碾钵
2.
实验室用蒸馏水或去离子水
3.
色谱级甲醇、氯化钠、氢氧化钠
4. 量筒,100ml或者更大
5.
用于萃取样品及收集萃取液的器皿
6.
滤纸,Whatman GF/A及相当者
7.
可吸取50ul和100ul容量的移液器及一次性吸头
8.
可吸取50ul和100ul的八道移液器及一次性吸头
9.
吸水纸
10.
450nm的酶标仪
11.
计时器
【样品提取液和清洗液的制备】
70%甲醇/水
1.
量取30ml的蒸馏水或去离子水并转移到带有盖子的干净玻璃容器内。
2.
量取70ml的甲醇并加入转移到上述容器内。
3.
盖紧盖子,充分混合,以备使用,但要防止挥发。
清洗液
取10ml 10倍浓缩清洗液到90ml蒸馏水中混匀待用。
注:稀释好的清洗液可室温保存下次再用,注意不要污染。
【样品的准备】
1.
粉碎好的样品过20目筛并在取样前充分混合,不立即分析的样品应放在冰箱中储存。
2.
称取10g样品和1gNaCl至一有盖容器中。
3.
量取50ml
70%的甲醇/水溶液与样品混合。
4.
盖好盖子高速均质3分钟。(或涡旋震荡3分钟,或摇床震荡15-20分钟)
5.
静置5分钟或4000转离心5分钟。
6.
用Whatman
GF/A玻璃纤维滤纸过滤一定量的上清液,收集滤液到一干净容器中,待测。
注:如遇发酵类样品其提取后的滤液PH<6,需用一浓度的NaOH将滤液PH调至6-7之间,待测。
【检测程序】
注意标准及样品做平行试验,可以提高检测的准确度及精确度
1.
开始实验前要求试剂及样品萃取液达到室温。
2.
取适量的孔条固定在微孔板架上,未使用的孔条,放入密封袋中保存。
3.
加入100ul的酶标记物到每个混合孔中。
4.
再加入50ul的标准品及样品到相应混合孔中,用八道移液器在混合孔中反复吸打4次混匀,然后转移100ul混合液到相应的测试孔;
5.
加入50ul抗体到对应的每一个测试孔,室温下孵育10分钟。
6.
倒掉微孔中溶液,微孔中注满清洗液,然后倒掉,重复3次,共四次洗板。
7.
一次清洗完后,倒掉孔中溶液,然后翻转微孔板在吸水纸上拍干。
8.
每孔中加入100ul的底物溶液。
9.
室温下孵育8分钟。(可根据颜色深浅适当延长缩短显色时间)
10.
每孔中加入100ul停止液。
11.
450nm读吸光度值。
【结果判断】
以标准品浓度和标准/样品的吸光度值为基础,通过
Casco的Logit-Log计算软件计算出样品中黄曲霉毒素的含量。如果样品的吸光度大于Z小标准的吸光度或小于标准的吸光度,即可说明此样品中黄曲霉毒素的含量小于2ppb或大于50ppb,不能准确测出。