服务名称:
转染级质粒大规模制备
提供商:
武汉巴菲尔生物
转染级质粒大规模制备
定义:常规方法提取的质粒由于浓度低且内毒素含量较高,不能直接用于细胞转染实验。利用高品质质粒抽提试剂可为您提供转染级别的大提质粒,可直接用于细胞转染实验。
质粒提取一般实验过程:
1.挑取琼脂培养皿上的单个菌落,移至3-10mlLB培养液中,37℃150rpm培养过夜。
2.取1.5ml培养液移至Eppendorf管内,12000rpm离心1分钟,弃上清液。
3.将细菌沉淀悬浮于100μl溶液(GTE溶液)中,强烈振荡使之充分混匀。
4.加入200μl新鲜配置的溶液(NaOH/SDS溶液),盖严管盖轻轻颠倒离心管数次以混合内容物,置冰上5-10分钟。
5.加入150μl溶液(5mol/L乙酸钠,pH5.2),轻轻颠倒数次,使溶液充分混匀,冰上放置3-5分钟。
6.10000rpm,4℃下离心10分钟,将上清液转移至另一离心管中。
7.加等体积的酚:氯仿,振荡混匀,10000rpm,4℃离心2min,将上清转移至另一离心管中。
8.加两倍体积无水乙醇沉淀双链DNA,充分混匀,室内放置2分钟
9.10000rpm,4℃下离心10分钟。
10.弃上清液,加1ml70%乙醇洗涤沉淀双链DNA,10000rmp,4℃下离心5分钟,倒尽乙醇,吸干管口残留乙醇。 11.加40μg/ml RNase的TE的缓冲液溶解DNA,电泳检测