重组牛肠激酶；肠激酶

重组肠激酶
 

Cat.No.	REK08
CAS	9017-74-8
EC	3.4.21.9
储存温度	-20℃或以下
来源	重组牛肠激酶，大肠杆菌表达
蛋白序列	氨基酸序列与牛肠激酶轻链一致

 

        雅心重组牛肠激酶是一种高纯度的重组牛肠激酶轻链片段。该酶经HPLC纯化，纯度高，特异性高，不含其他蛋白酶。肠激酶可以切割含有四个天冬氨酸的赖氨酸羧基端肽键：天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 赖氨酸（DDDDK）。可以在较宽pH范围（4.5-9.5）和较宽温度范围内有效切割融合蛋白。肠激酶可去除位于蛋白质N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合标签。
 
  

25℃酶切条件	按照酶活性定义，酶切条件举例： 25mM Tris-HCl 8.0体系中： 融合蛋白  0.1-1mg/ml（蛋白总量50-100µg） 重组EK   0.1-0.2U 25℃过夜酶切，或完全酶切需16-24h，用SDS-PAGE检测酶切效果
4℃低温酶切条件	4℃能对底物进行有效酶切，但需要将酶切时间延长至48-64h，或增加2-3倍酶量
酶切优化和放大	优化：可以对酶切条件进行优化，例如缓冲液pH，融合蛋白浓度，EK的量，以及酶切时间，使融合蛋白能在稳定条件下被酶切，用SDS-PAGE检测酶切效果。 放大：选择优化后的反应条件，按该条件等比例放大，用SDS-PAGE检测酶切效果
去除重组肠激酶的方法	使用胰蛋白酶YZ剂亲和层析（例如sigma T0637）去除重组肠激酶
注意	不建议37℃条件下酶切，可能会有非特异性酶切出现

 在＞200mM 咪唑，或＞200mMNaCl，或＞5%甘油，酶切效果受影响。可参照以下推荐方法进行酶切：
1）为获得理想酶切结果，请将样品透析到25mM Tris-HCl 8.0缓冲液中，再进行酶切。
2）若不便透析，可将样品稀释，咪唑含量在100mM以下，NaCl浓度在50mM以下，甘油浓度小于5%以下进行酶切，酶的用量与蛋白的比例不变（即1U酶切500µg蛋白）。
3）如果样品溶液中含有上述成分中的一种或多种，且不便去除，此时适当增加酶量或延长酶切时间，也可达到较好酶切效果。
 酶液储存稳定性：-20℃，24个月稳定；25℃，一周内，无活性损失。缓冲体系：50mM Tris-HCl，pH8.0，250mM NaCl，2mMCa²⁺，50%甘油。
酶液反复冻融稳定性：反复冻融5次，无活性损失。
运输稳定性：蓝冰保温运输，稳定。