杆状病毒-昆虫蛋白表达及纯化服务

杆状病毒（Baculovirus）-昆虫蛋白表达及纯化服务

杆状病毒表达系统（Baculovirus Expression Vector System ，BEVS），普遍被认为是一个强大的且通用的表达系统，用来制备大规模的重组蛋白。杆状病毒蛋白表达系统（BEVS）凭借其简易的流程、高表达水平及翻译后修饰功能而被普遍认可为一种表达大规模蛋白的强有力的工具。

服务编号：RJSC042                                                                                                                     价格：询价

主要步骤

内容

交付内容

交付时间

目标基因全基因合成

1. 从基因库中搜索目标蛋白的cDNA序列。
2. 根据选用的表达系统对cDNA进行密码子，mRNA二级结构等的优化。
3. 合成设计好的基因序列。

目的基因 （在T载体或常规穿梭载体上）及测序报告。

2周

目标基因亚克隆到pFastBac供体质粒

1. 扩增并抽提含有目标基因的载体质粒。
2. 将目标基因亚克隆到pFastBac供体载体上。
3. 测序验证构建质粒的准确性。
4. 通过中抽获得重组的质粒DNA。

正确构建的重组表达质粒，含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。

2-3周

制备重组杆状病毒Bacmid DNA

1. 将重组的pFastBac供体质粒转化到大肠杆菌DH10Bac感受态菌株中。
2. 通过抗生素平板筛选出含有重组Bacmid的菌株。
3. 抽提质粒获得重组的杆状病毒Bacmid DNA。

重组杆状病毒Bacmid DNA，含重组质粒的DH10Bac菌株

2周

转染昆虫细胞Sf-9

1. 利用转染试剂将重组Bacmid质粒转入昆虫细胞Sf-9。
2. 收集成熟的重组杆状病毒并检测病毒的滴度。
3. 通过多次感染提高病毒的滴度，并扩增病毒数量。
4. 通过SDS-PAGE和Western-blot检测目标蛋白表达情况。

高滴度重组杆状病毒，病毒滴度及蛋白表达检测结果（如果转染不成功，则不收取费用。如果没有检测到目标蛋白表达，则只收取50%实验费用）。

3周

目标蛋白表达及纯化

1. 培养500ml昆虫细胞至对数期，然后加入适量病毒感染细胞并表达目标蛋白。
2. 收集含有目标蛋白的部分（细胞或培养上清）。
3. 通过亲和，离子交换，疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。
4. 通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制产品质量。
5. 通过Western-blot验证目标蛋白正确性。
6. 可提供表达细胞株：Sf-9，Sf-9 Mimic，High Five。

纯化好的目标蛋白0.1~2mg及纯化报告。可按客户要求提供含纯化标签（Tag）或切除纯化标签（Tag）的蛋白，纯度可达90%以上。

2-3周

目标蛋白的再加工及详细检测

1. 内毒素去除，CJ，冻干等进一步加工。
2. 通过HPLC，质谱等方法详细检测目标蛋白的质量。

加工后的终产品及相关实验和检测报告。

2-3周

大规模制备

按照小试工艺放大生产规模，制备客户需要的合格蛋白产品。

合格的目标蛋白及服务报告。

协商