重组蛋白的大规模表达与纯化

主要基于大肠杆菌（E. coli）表达系统
 
1、目标基因亚克隆
利用KOD-Plus、Pfu等高保真酶通过PCR扩增含有酶切位点的目标基因，连接到表达载体上（以PET系列载体为主），这些载体含有His、GST和Trx等助溶标签，便于后续纯化，同时这些载体上含有蛋白酶的酶切位点，可按客户要求切除或保留标签。
2、目标蛋白的表达与纯化
将重组表达载体转化合适的大肠杆菌表达菌株中，对时间、温度以及IPTG浓度等表达条件进行优化，探索小量的可溶性蛋白表达和纯化条件
根据小量表达结果，摇瓶培养1L-10L重组细菌，利用亲和层析（His和GST等）、离子交换层析（Q柱和SP柱）、凝胶过滤（Superdex S75、S200等）等层析方法纯化表达的重组蛋白。
通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制产品质量。
通过Western-blot验证目标蛋白正确性
交付内容：纯化好的目标蛋白5~10mg及纯化报告。可按客户要求提供含纯化标签（Tag）或切除纯化标签（Tag）的蛋白，纯度可达95%以上。
时间：2-3周