Colilert(科立得) 水中大肠菌群和大肠埃希氏菌 定性/定量检测 (国标方法)

Colilert( 科立得)  24 小时即可定性/ 定量检测总大肠菌群(Coliform) 和大肠埃希氏菌(E.Coli)

 

爱德士的 科立得® 试剂在广泛的被使用在检测水中总大肠菌群、大肠埃希氏菌以及耐热大肠菌群（粪大肠菌群）。在美国, 90 ％以上的实验室使用 科立得® 的专利[固定底物技术酶底物法] (Defined Substrate Technology, DST®) 。在美国、加拿大与日本的饮用水市场 科立得® 的使用率事实上大于其它所有检验方法的总和。。

科立得™ 获得美国环保署的认可，并列为《水与废水检验标准测试方法》。在ZG，科立得™是WY商品化的固定底物技术酶底物法而列入ZG 国家标准《生活饮用水标准检验方法》（GB/T5750.12-2006）。

 

如何使用科立得®

 

定性测试（P/A ）

步

在100ml水样中加入科立得®试剂，混匀，36℃±1培养24h。  

第二步 判读结果

无色=阴性

黄色=总大肠菌群阳性

黄色＋荧光=大肠埃希氏菌阳性

注：耐热大肠菌群（粪大肠菌群）需44.5℃培养24h后，观察黄色为阳性

 

定量检测

步

在100ml水样中加入科立得®试剂，混匀  

第二步

倒入Quanti-Tray™（51孔）或者 Quanti-Tray™/2000 （97孔）定量盘中  

第三步

用程控定量封口机对定量盘进行封装，36℃±1℃培养24小时  

第四步

Quanti-Tray™ 51 孔定量盘结果判读

无色=阴性

黄色格子=总大肠菌群

黄色＋荧光格子=大肠埃希氏菌

对照MPN表计算结果

注：耐热大肠菌群（粪大肠菌群）需44.5℃培养24h后，观察黄色格子，为阳性结果，对照MPN表   

Quanti-Tray™/2000 97孔定量盘结果判读

无色=阴性

黄色格子=总大肠菌群

黄色＋荧光格子=大肠埃希氏菌

对照MPN表计算结果

注：耐热大肠菌群（粪大肠菌群）需44.5℃培养24h后，观察黄色格子，对照MPN表

 

 

科学性：科立得(Colilert)® 的工作原理

 

科立得®的成分是受专利保护的MMO-MUG选择性培养基（Minimal Media ONPG-MUG）。

当科立得®加入含有总大肠菌群细菌组的水样，目标细菌在MMO-MUG培养基中繁殖，大肠菌群细菌组产生的特异性生物酶β－半乳糖苷酶能分解MMO-MUG培养基中的色原底物ONPG，使培养基呈现黄色反应；同时水样中大肠埃希氏菌产生特异性的β－葡萄糖醛酸酶分解MMO-MUG培养基中的荧光底物MUG，产生特征性荧光。同样原理，耐热大肠菌群（粪大肠菌群）在培养44.5℃时会分解MMO-MUG培养基中的色原底物ONPG，使培养基呈现黄色反应。

大肠杆菌以β-葡糖醛糖苷酶代谢甲基香豆基葡糖醛酸苷（MUG）产生萤光。因为大多数非─大肠杆菌属菌类没有这些酶，所以无法在 科立得® 里生长及干涉这些物质。

有这些酶的少数非─大肠杆菌属菌类会受到 科立得® 特殊配方的基质选择性的YZ作用。

科立得®可以定性检测水中大肠菌群和大肠埃希氏菌以及粪大肠菌群。当水样中少数非目标细菌的生物酶试图和ONPG或MUG反应，干扰检测结果时， MMO-MUG培养基中特殊配方的基质会YZ其反应进程，控制假阳性的产生；同时，这些特殊配方基质可以有效促进目标细菌的生物酶和底物反应， 所以假阴性发生率比传统方法更低。 这就是采用固定底物技术（DST）的酶底物法，及其专利的MMO-MUG培养基。如果联合Quanti-Tray™（51孔定量盘）或者Quanti-Tray™2000（97孔定量盘）使用， 可以定量检测100ml水中1~200个或1~2419个目标细菌，而不要稀释，这就是固定底物技术（DST）酶底物法的多孔定量盘法。

普通的酶底物法采用ONPG-MUG培养基，而非MMO-MUG培养基，不能有效降低假阳性和假阴性的产生，也并非《生活饮用水标准检验方法》（GB/T5750.12-2006）的国标检测方法。

所有的爱德士「指定受检物检验技术」（DST®）试剂都可用于定性测试（P/A）检验容器、 Quanti-Tray™ 定量盘或 Quanti-Tray™ 定量盘/2000 检验盘里。

 

 

科立得(Colilert)® 问答集

科立得®的贮存条件是什么？
2-30°C避光储存。

科立得® 阳性比色盘是什么？
科立得® 阳性比色盘是一种液体的比色剂。目的在于协助区别结果是否显阳性。

科立得® 阳性比色盘如何使用？
在24-28小时期间，使用比色盘对照每个反应的样品。当检测结果颜色变化或者荧光显色不明显时，将比色盘与检测结果比较，任何与比色盘颜色相同或更强的黄色及萤光都考虑为阳性结果。

科立得® 试剂应该是什么颜色？
科立得® 试剂应该是干燥，流动性的，白色或略带灰 (或黄) 色的白色。如遇到任何有关试剂颜色或有效性的问题请您与爱德士技术服务部门联络。

科立得® 检测结果在28 小时后判读准确吗？
定性试验时，如果是阴性结果就有效。 做定量检测时，如果科立得® 超过培养时间，没有任何颜色变化是有效的阴性检验结果；超过 28 小时出现黄色是无效的结果，应重新检验。

科立得®检测结果在24 小时内判读准确吗？
定性试验，如果培养未满24小时，而样品中总大肠菌群以及大肠埃希氏菌都显阳性，则此结果有效；如果只是大肠菌群呈阳性（黄色），则可证明总大肠菌群结果有效，还需要等到24小时后判断是否含有大肠埃希氏菌。

为何水样要培养 24-28 小时？
科立得®试剂中添加的YZ与ONPG和MUG反应的非大肠菌群属的YZ剂Z多可以作用到28小时，如果超过了28小时，一些干扰细菌就会克服科立得®的YZ系统而与 ONPG 或 MUG 起反应。超过28小时的阴性结果有效，但是阳性结果需要进行确认试验。

可以使用科立得®进行定量检测吗？
可以， 科立得®可用 Quanti-Tray™（51孔）定量盘 ,Quanti-Tray™ 2000（97孔）定量盘进行定量检测。

科立得®是否是ZG国家标准方法？
是，科立得®已经列入ZG《生活饮用水标准检测方法》GB/T5750.12-2006，是WY商品化的固定底物技术酶底物法，其成分是MMO-MUG培养基，并受专利保护。

科立得®的检出线是多少？
科立得®能检测出100ml水样中的1个总大肠菌群与大肠埃希氏菌以及粪大肠菌群菌体。

科立得®的贮存期有多久？
科立得®的贮存期从制造日期算起， 科立得®可贮存18个月。

 

 

部分附件

Quanti-Tray定量程控封口机  

Quanti-Tray 51孔定量盘橡胶衬垫 或 Quanti-Tray 97孔定量盘橡胶衬垫  

Quanti-Tray 51孔定量盘 或 Quanti-Tray 2000 97孔定量盘®

Colilert 51孔阳性比色盘 或 Colilert 97孔阳性比色盘  

Colilert定性阳性比色瓶  

取样瓶  

紫外灯

培养箱

 

温馨提示：不可用于临床ZL。