Thermo Scientific 免疫印迹产品——蛋白转移膜，滤纸及转膜缓冲液

在印迹转移中，转膜成功与否，直接关系到整个Western Blotting 的成败：其中转移缓冲液，膜的选择至关重要。要使蛋白质组分能有效地从凝胶转移到固相纸膜上,缓冲液的pH很重要。有些分子量并不是很大的蛋白质区带，即使延长电转移时间也不能从凝胶转移到固相纸膜上。这是由于蛋白质在转移缓冲液中恰好处于等电点状态所造成的，因此应适当改变转移缓冲液的pH以利于转膜。转移缓冲液中都含有适量的甲醇，对于分子量较小的蛋白质，甲醇能促进它们固定在固相纸膜上，但对于大分子量蛋白质，尤其是碱性蛋白质，在转移缓冲液中是不宜加入甲醇的。因甲醇使凝胶孔径变小，不利于分子量较大的蛋白质从凝胶中转移出。由于甲醇能将结合在碱性蛋白质上面的SDS解离出来，而使其带正电或呈电中性，蛋白质也就更难从凝胶中转移出。此外，膜的选择也很重要.硝酸纤维素NC膜、聚偏二氟乙烯PVDF膜，重氮化膜和阳离子尼龙膜为Z常用的膜，硝酸纤维素NC膜使用得Z普遍。因其价格便宜，使用方便，吸附蛋白质容量大，可用各种染色方法进行检测。它的缺点是：与蛋白的结合为非共价性，膜干燥后很脆，易碎。重氮化膜则与蛋白形成共价结合，有较好的机械强度，但它只能在那些没有游离氨基的凝胶缓冲液中使用。阳离子尼龙膜与蛋白是通过离子键结合的，其结合容量很大，尤其对分子量较小的蛋白质结合特别有效。它有极好的机械强度，在冲洗和干燥中膜的大小不发生改变。PVDF膜是用来吸附从各种凝胶中转印的蛋白质的用膜。这种疏水膜呈均一控制的孔结构，具有极强的吸附生物分子的能力。与硝酸纤维素膜相比，Immobilon-P膜具有易于操作，染色性能好、抗溶剂能力强和信噪比高的特点，提高了检测的灵敏度。其开放的孔结构使其容易接近被吸收的蛋白质，并去除背景上没有吸附的探针。可以说，它是免疫检测理想的印迹膜。此外，膜的孔径的大小也是需要考虑的重要因素。对于分子量大于20kD的蛋白质，需要选择0.45um的膜，分子量小于20kD，需要选择0.2um的膜。分子量小于7kD，需要选择0.2um的膜。有的蛋白质由于分子量太大，而很难转膜，针对这种情况，PIERCE专门推出了在胶上做Blotting的试剂盒。