产品描述:
QuickShuttle一分钟快速转染试剂是北京康碧泉生物科技有限公司新近研发的阳离子转染试剂,具有GX、低毒和易于使用等优点,推荐用于哺乳动物细胞和昆虫细胞的瞬时转染以及稳定细胞系构建,可以将转染实验操作缩短到一分钟即可完成。
重要提示:
1、以24孔细胞板转染实验为例,推荐一次(即每孔)转染实验的低内毒素质粒DNA用量为2ug,转染试剂用量为3-5ul(转染试剂的Z适用量需要根据不同细胞和不同培养基来优化,但理论上不超出3-5ul范围),转染实验中使用无菌生理盐水稀释质粒和转染试剂即可。
2、为获得转染效率并尽可能降低细胞毒性,建议转染时细胞密度控制在50-80%范围内,而且在不影响转染效率的前提下,尽可能减少转染试剂的用量。
3、QuickShuttle转染试剂极大简化了转染步骤,转染试剂和质粒混合后无需室温静置孵育,可直接加入含血清的细胞培养基中进行转染,而且无需在转染后补加血清和更换培养基。
4、如果实验目的在于筛选抗药性稳定细胞系,使用QuickShuttle进行转染实验可做进一步简化,即细胞传代后可直接进行转染实验,从而节省了18-24小时的转染前细胞培养时间。
5、QuickShuttle转染试剂建议储存温度为2-8 ℃,但在-30℃到室温范围内均可长时间稳定保存。
转染步骤:
下述所有实验步骤均针对哺乳动物贴壁细胞在24孔细胞板中的转染实验优化建立,不同细胞和不同培养基可能需要优化转染试剂的用量以获得实验效果。质粒DNA:请用能够取出内毒素的方法制备高质量的质粒DNA。稀释液:0.85%(W/V)生理盐水,高压消毒或CJ过滤。
1、 转染前18-24小时接种细胞到24孔细胞板中,每孔5-10*10 4细胞,1ml完全培养基。备注:如果筛选抗药性稳定细胞系,可以考虑简化的实验步骤,即在细胞传代后直接按下述步骤2-5进行转染实验,无需18-24小时的等候时间。
2、 将2ug质粒DNA和3-5ul转染试剂分别稀释到50ul生理盐水中。备注:转染试剂的Z适用量需要根据不同细胞盒不同培养基来优化,但理论上不超出3-5ul范围。
3、 合并上述两溶液并混匀。备注:无需其他转染试剂所需的10-30分钟的等待时间。
4、 将上述复合物直接加入到24孔细胞板中的细胞培养基中,轻摇细胞板以混匀。备注:转染复合物可直接加入含血清的细胞培养基中进行转染实验。
5、 将细胞板移至37℃/5%CO2 孵箱中进行培养。备注:无需在转然后4-6小时补加血清或更换培养基。
6、 24-72小时后根据实验需要进行瞬时表达分析或稳定细胞系加压筛选。
联系方式:QQ1197253964
温馨提示:不可用于临床ZL。