◆ 研究背景
定量蛋白质组学,近年来获得了巨大的技术进步,主要体现在各类高分辨率质谱在蛋白质组学中的应用。以质谱为基础的定量蛋白质组学,主要可以分成两类,是稳定同位素标记的定量蛋白质组学,比如SILAC 和iTRAQ;另一类是非标记的定量蛋白质组学技术,比如使用Maxquant 软件进行的非标记蛋白质组学分析。我们运用Maxquant软件,采用基于图像方式简化大量LC-MS数据分析,并对肽和蛋白质进行相对定量。实验证明此技术具有较好的定量准确性和可信性。
◆ 蛋白质组学非标记定量分析的特点
1. 对液相色谱串联质谱的稳定性和重复性要求较高
2. 无需昂贵的同位素标签做内标,实验耗费低
3. 对样本的操作较少,并且不受样品条件的限制,克服了标记定量技术在对多个样本进行定量方面的缺陷
4. 可以检测到的肽段的动态范围可以达到4个数量级以上,提高了低丰度蛋白质的检测效率和非标记定量准确性
◆ Maxquant软件非标记定量分析的原理
Maxquant软件对液相色谱串联质谱数据非标记定量分析是以MS1为基础,将质谱数据由谱峰形式转化为直观的类似双向凝胶的图谱,谱图上每一个点代表一个肽段,再比较不同样本相应肽段的强度,从而对肽段对应的蛋白质经行相对定量。
![](http://item.yiqi.com/pic/ConPic/4/A1376467206_small.jpg)
◆ 分析流程
样品经Trypsin 酶切,酶切产物由高精度质谱Q Excative(Thermo Scientific)分析,分析数据由Maxquant软件进行分析。
![](http://item.yiqi.com/pic/ConPic/4/A1376467207_small.jpg)
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