人基因组上已明确的miRNA有500多种,同时研究也表明,miRNA的异常表达与癌症有关。常规的基因芯片方法不适宜miRNA的检测,因为miRNA与mRNA不同:(1)miRNA分子量相当小,且丰度差异较大;(2)成熟miRNA与pre-miRNA和pri-miRNA共存,三者具有不同长度;(3)许多miRNA的序列非常相似,例如同型分子的不同亚型,仅有一个或者几个碱基的差异。Signosis基于自有专利技术开发出高通量miRNA芯片检测试剂,一次实验可检测数百种不同miRNA表达,并能区分具有单个碱基差异的miRNA。
A.产品优势
分辨力强——能分辨只有单个碱基差异的同源miRNA,包括let7同源miRNA,以及前体miRNA和成熟miRNA;
线性扩增——捕获的miRNA经T7线性扩增,避免了PCR扩增引入的偏差;
无需预纯化——总RNA可以直接进行分析,无需预纯化;
操作简单——实验步骤简单;
自有专利——基于自有专利T7-OLA(寡核酸连接法)扩增技术开发。
B.技术原理
miRNA分子与两条寡核苷酸(oligo)连接,形成RNA/DNA杂合体。含有生物素(biotin,B)的短序列互补结合到其中的一个oligo上。通过结合有链霉亲和素(Streptavidin)的磁珠分离出杂合体。用DNA连接酶连接两条oligo。单个核苷酸的差异就会阻止杂合体的形成或两条oligo的连接。随后,经过T7线性扩增(转录),生物素标记的UTP整合到RNA序列中。把转录好的RNA和膜上的Tag互补序列进行杂交。加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素及底物进行miRNA表达水平的检测。
C.原理图
D.结果展示
用肿瘤miRNA芯片检测试剂分别分析HepG2,293和HeLa细胞中132种肿瘤相关miRNA的表达情况及表达差异。
小鼠miRNA芯片检测试剂(119 miRNAs)AP-0005
Let-7a-5p | Let-7b-5p | Let-7c-5p | Let-7d-5p | Let-7e-5p | Let-7f-5p | Let-7g-5p | Let-7i-5p | miR-1 | miR-7-5p |
miR-9-5p | miR-10a-5p | miR-15a-5p | miR-15b-5p | miR-16-5p | miR-17-5p | miR-18a-5p | miR-18b-5p | miR-19a-3p | miR-19b-3p |
miR-20a-5p | miR-21-5p | miR-25-3p | miR-28-5p | miR-34a-5p | miR-99a-5p | miR-122a-5p | | miR-125a-5p | miR-125b-5p |
miR-126-3p | | miR-133a-3p | miR-133b | miR-143-3p | miR-145-5p | miR-146a-5p | miR-146b-5p | miR-148a-3p | miR-155-5p |
miR-181a-5p | miR-181b-5p | miR-181c-5p | miR-182-5p | miR-192-5p | miR-194-5p | miR-195-5p | miR-199a-5p | | |
miR-200a-3p | miR-200c-3p | miR-204-5p | miR-206 | miR-216-5p | miR-223-3p | miR-224-5p | miR-342-3p | | miR-375 |
miR-9-1-5p | miR-10b-5p | | miR-22-3p | miR-23a-3p | miR-24-3p | miR-26a-5p | miR-26b-5p | miR-27a-3p | miR-27b-3p |
miR-29a-3p | miR-29b-3p | miR-29c-3p | | miR-30a-5p | miR-30b-5p | miR-30c-5p | miR-92-3p | miR-92b-3p | miR-93-5p |
| miR-101-1-3p | miR-103-3p | miR-106a-5p | miR-106b-5p | miR-107 | miR-128a-3p | miR-128b-3p | miR-132-3p | miR-134-5p |
miR-135b-5p | miR-136-5p | miR-137 | miR-140-5p | miR-141-3p | | miR-149-5p | miR-150-5p | miR-151-3p | miR-153-3p |
miR-154-5p | miR-181d-5p | miR-183-5p | miR-185-5p | miR-186-5p | miR-188-5p | miR-190-5p | miR-191-5p | miR-196a-5p | miR-196b-5p |
miR-197-3p | | miR-200b-3p | miR-202-5p | miR-203a | miR-205-5p | miR-210-3p | miR-214-3p | miR-215-5p | miR-218-5p |
miR-219 | miR-221-3p | miR-222-3p | miR-296-5p | | | | miR-100-5p | miR-127 | miR-142-5p |
miR-31-5p | miR-181a-3p | U6 | | | | | | | |
E.产品应用实例
- MicroRNA-21 is Induced by Rapamycin in a Model of Tuberous Sclerosis (TSC) and Lymphangioleiomyomatosis (LAM). Trindade AJ, Medvetz DA, Neuman NA, Myachina F, Yu J, Priolo C, Henske EP. PLoS One 2013 Mar;9 8(3):e60014.
- Prevention of Chlamydia-induced infertility by inhibition of local caspaseactivity. Igietseme JU, Omosun Y, Partin J, Goldstein J, He Q, Joseph K, Ellerson D, Ansari U, Eko FO, Bandea C, Zhong G, Black CM. J Infect Dis., 2013 Apr;207(7):1095-104.
- Non-Coding RNAs: Functional Aspects and Diagnostic Utility in Oncology. Kim T, Reitmair A. Int J Mol Sci., 2013 Mar;14(3):4934-68.
温馨提示:不可用于临床ZL。
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