作为分子生物学实验操作的案头资料-红皮书(Current Protocol in Molecular Biology)将酵母作为一个独立的章节与其他常用分子生物学实验技术并行而列;而被生命科学实验室奉为圣经的分子克隆,其第三版的多个章节则穿插有不同方面的酵母实验操作,足见酵母遗传学方法在当今生命科学研究中的重要作用。芽生酵母(budding yeast, Saccharomyces cerevisiae)俗称酿酒酵母,是单细胞真核生物,它的基因组比较简单(仅为大肠杆菌的3-4倍),易于操作,遗传背景相对清楚,加之其突变株又易于分离,而被誉为“真核大肠杆菌”(Eukaryotic E.coli)和“体内试管”(In vivo test tube),因而是研究高等真核生物基因功能的理想模式生物。一个向深度发展的分子生物学实验室正象离不开大肠杆菌的操作一样,离不开酵母实验操作。酵母在生命科学研究中主要用于以下几个方面:
1. 外源基因的表达(Foreign gene expression in yeast)
2. 蛋白质-蛋白质之间相互作用(Protein-protein interaction trap,Yeast two-hybrid, One-hybrid)
3. DNA-蛋白质之间相互作用(Yeast one-hybrid system, Y1H))
4. 高等动、植物和人类基因功能分析-功能互补(C-test)
上述前三项已为众多生命科学工作者所熟悉且已被广泛使用, 从技术上来讲, 前三项只涉及酵母的培养和质粒转化,一般实验室都容易开展。而将酵母用于研究高等动、植物和人类基因功能分析方面则除了需要掌握通用的细胞和分子生物学实验相关技术外,首先需要熟悉细胞生物学的核心理论(细胞增殖与分化、细胞周期调节等),只有这样才能有见解的提出问题,然后在解决问题的过程中方能从分子进化的观点想到用较为简单的模式生物来进行基因功能互补分析,其次还需要对酵母的细胞生物学和遗传学理论作一初步了解,接下来即可准备材料开展工作了。
服务内容:
1、理论和技术咨询(包括课题设计)
2、特殊培养基选择与定制
3、蛋白质相互作用-DNA与蛋白质相互作用的克隆筛选与鉴定
4、酵母质粒回收
5、外源基因在酵母中的表达
6、如何利用酵母研究动、植物靶基因的功能
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泛基诺(FunGenome)即用增强型培养基(方便增强型)
选择性营养缺陷型酵母培养基SD培养基(Synthetic Dropout Media) SC-Droupout
泛基诺酵母缺陷培养基种类:一缺培养基单缺培养基/二缺培养基双缺培养基/三缺培养基/四缺培养基/五缺培养基
(1).泛基诺一缺培养基:以SD/-Ura(Sc-Ura培养基)为代表的此类酵母SC选择培养基或SD缺陷培养基主要用于单质粒酵母转化筛选
用途:外源基因在酵母中的表达、异源基因功能互补、酵母单杂交系统和酵母双杂交系统初始质粒转化
SD/-Trp, SD/-Leu, SD/-His, SD/-Ura, SD/-Met, SD/-Ade
SC-Trp,SC-Leu, SC-His, SC-Ura, SC-Met, SC-Ade
(2).泛基诺(FunGenome)二缺培养基:此类酵母SC选择培养基-SD培养基用于双质粒酵母转化筛选
用途:外源基因在酵母中的表达(组成型表达或诱导型表达:参见泛基诺技术总监的文章:《外源基因在酵母中的表达》)、异源基因功能互补(参见泛基诺博文基因功能研究系列)、酵母单杂交系统(参见泛基诺《转录因子研究的夏日玫瑰》一文)和酵母双杂交系统(参见泛基诺《神奇的酵母遗传学》三篇系列文章)初始质粒转化、免疫共沉淀(Coimmunoprecipitation)、Y187和AH109 酵母交配实验、接合型二倍体筛选
SD/-Trp-Leu, SD/-Trp-His, SD/-Trp-Ade, SD/-Leu-Ade, SD/-His-Ade, SD/-Leu-His, SD/-Ura-Trp, SD/-Ura-Leu,SD/-Ura -His
SC-Trp-Leu, SC-Trp-His, SC-Trp-Ade, SC-Leu-Ade, SC-His-Ade, SC-Leu-His, SC-Ura-Trp, SC-Ura-Leu,SC -Ura-His
(3).泛基诺(FunGenome)三缺培养基:此类酵母SC选择培养基-SD培养基用于双质粒酵母转化筛选和报告基因检测
用途:外源基因在酵母中的表达、异源基因功能互补、酵母单杂交系统和酵母双杂交系统报告基因检测Y187和AH109 酵母交配实验后报告基因分析(His3,Ade2)
SD/-Trp-Leu-His, SD/-Trp-Leu-Ade, SD/-Ura-Trp-His, SD/-Ura-Leu-His, SD/-Trp-His-Ade, SD/-Ura-Trp-Leu
SC-Trp-Leu-His, SC-Trp-Leu-Ade, SC-Ura-Trp-His, SC-Ura-Leu-His ,SC-Trp-His-Ade, SC-Ura-Trp-Leu
(4).泛基诺(FunGenome)四缺培养基:此类酵母SC选择培养基-SD培养基主要用于报告基因分析
用途:酵母双杂交系统和酵母三杂交系统报告基因检测 、Y187和AH109 酵母交配实验后报告基因分析(His3,Ade2)
SD/-Trp-Leu-His-Ade, SD/-Ura-Trp-Leu-His, SD/-Ura-Trp-Leu-Met
SC-Trp-Leu-His-Ade, SC-Ura-Trp-Leu-His, SC-Ura-Trp-Leu-Met
(5).泛基诺(FunGenome)五缺培养基:此类酵母SC选择培养基-SD培养基主要用于报告基因分析和表型分析
用途:酵母三杂交系统报告基因检测(His3,Ade2)、酵母营养缺陷型分离鉴定和表型分析
SD/-Trp-Leu-His-Ade-Met, SD/-Ura-Trp-Leu-His-Ade,SD/-Ura-Trp-Leu-His-Met,SD/-Ura-Trp-Leu-Ade-Met,SD/-Ura-Leu-His-Ade-Met
SC-Trp-Leu-His-Ade-Met, SC-Ura-Trp-Leu-His-Ade,SC-Ura-Trp-Leu-His-Met,SC-Ura-Trp-Leu-Ade-Met,SC-Ura-Leu-His-Ade-Met
(6).泛基诺(FunGenome)六缺培养基:此类酵母SC选择培养基-SD培养基主要用于报告基因分析、表型分析和药物毒理分析
用途:酵母三杂交系统报告基因检测、酵母营养缺陷型分离鉴定和表型分析、药物毒理分析 SD/-Ura-Trp-Leu-His-Ade-Met, SC-Ura-Trp-Leu-His-Ade-Met
上述培养基称为选择性营养缺陷型酵母培养基,主要用于酵母质粒转化筛选,故又称为酵母选择培养基,培养基配方及配制方法注意事项等可参见下面的泛基诺温馨提示1,2,3
对于上述酵母筛选标记的解释可参见博文:《神奇的酵母遗传学与高等生物基因功能研究讲座三》
包装:40克/瓶