circRNA实时荧光定量PCR（qPCR）技术服务

1. 服务简介
      circRNA（Circular RNA，环状 RNA）是近年来发现的一类新的具有调控功能的非编码 RNA，它存在于各种生物体中，具有牢固的环状结构、物种保守性以及组织特异性，不易被核酸酶裂解。它是一类特殊的内源性 RNA 分子，有别于传统线性 RNA。在真核生物体中，大部分 circRNA 是由外显子构成（也有内含子甚至 tRNA）。
      江苏楚天生物用自己研发生产的基因表达定量产品为客户提供完整的基因表达定量服务。客户只需提供样品，我们即可提供基因表达定量结果。
 
ZD与难点：引物设计

      circRNA 分子呈封闭环状结构，这与传统的线性 RNA（linear RNA，含 5’和 3’末端）不同，在进行 qPCR 实验时，怎样进行有效的引物设计即为关键。楚天生物采用 “背靠背” 式的引物设计理念， 根据 circRNA分子的结构特性，在其特异的拼接位点两侧设计引物，这有别于传统线性 RNA 的引物设计，示意图见下方。



服务优势

Ⅰ 引物设计独特：
    楚天生物秉承独有的引物设计理念，采用“背靠背”式引物，通过巧妙识别特异位点，大幅提高检测准确性。

Ⅱ circRNA 检测效果：
    经过精心设计和反复验证，楚天生物 PCR 芯片能够检测低丰度 RNA。

Ⅲ circRNA 表达定量Z准确：
    根据基因表达定量金标准——qPCR 技术研发而成，准确性定量目标 circRNA。



2. 接受样品类型

a) 组织样品（需提供≥100mg组织。必须保存在RNAlater或类似RNA保护溶液中）；
b) 体外培养细胞（需提供≥10^6个细胞。必须保存在RNAlater或类似RNA保护溶液中）；
c) 全血（需提供≥2ml全血）；
d) 总RNA（需提供≥5ug total RNA）；
e) 其他样品，请来电或邮件咨询。
 
      所有类型样品必须用冰袋或干冰寄至公司。冰袋或干冰应足量，以确保样品寄至公司时，冰袋或干冰未完全融化。使用invitrogen品PaiTRIzol试剂，按以上指导方法邮寄样品，3天内不会影响RNA质量。
 

3. 服务内容

① 引物设计与合成    由江苏楚天生物提供实验所需引物；
② RNA抽提纯化    在组织或细胞样品中加入TRIzol试剂（invitrogen），匀浆或裂解后抽提RNA；
③ 基因组DNA消化处理    使用DNA消化液消化基因组残余DNA，程度降低实验干扰；
④ RNA质量检测    使用Denovix DS-11超微量分光光度计测定样本RNA浓度和纯度；
⑤ cDNA合成    将circRNA反转录为cDNA；
⑥ 实时荧光定量PCR检测   加入cDNA和反应液，在Roche 480 Ⅱ中进行扩增和检测；
⑦ 提交实验数据和报告    服务报告提交下列数据：实时荧光定量PCR扩增曲线；熔解曲线；基因表达定量结果分析，图表等。


4. 服务价格
 

服务名称	具体内容	价格
circRNA 实时荧光定量PCR检测	提供实时荧光定量PCR扩增曲线，熔解曲线，分析报告等	询价

 

5. 服务报告提交时间

      收到样品后10-15个工作日。



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