1. 服务简介 microRNA是一类大小约为22个碱基的小RNA分子。它们在转录后阶段对基因表达进行调控。调控机制是通过与靶基因的mRNA互补序列结合,YZ蛋白质的翻译或降低mRNA的稳定性,从而YZ靶基因的表达。microRNA在细胞的发育,分化,生长等生命活动中起着重要调控作用。
江苏楚天生物采用 SYBR Green I 实时荧光定量PCR方法对您感兴趣的miRNA进行相对定量。客户只需提供样品,我们即可提供基因表达定量结果。
江苏楚天生物第三代 miRNA 检测技术 miRNA 由于自身结构较为特殊,片段长度较短(约为 22 个碱基),无法直接应用 PCR 技术进行扩增。针对该特性,必须要延伸目标 miRNA 的长度,构建一个足够长的 PCR 模板。目前使用较多的方法为 PolyA 加尾法和通用型茎环引物法。加尾法可以检测到成熟 miRNA 及 pre-miRNA,特异性稍低;茎环法只针对成熟 miRNA,特异性相对较高。
但是目前越来越多的实验发现,在检测目的miRNA时,通用型茎环引物并不适用于所有miRNA,并且在加入无模板中反应后,会发现实验本地过高,造成一定的实验误差。
江苏楚天生物(CT Bioscience)通过持续的研发工作,已升级到第三代 miRNA 检测方法——即为每个 miRNA 都设计专门的反转录茎环引物,大大增强检测效果。我们的 miRNA PCR 芯片采用 SYBR Green I 实时荧光 PCR 进行准确定量,并根据不同 miRNA 的功能特性,研发出ZT应用的 miRNA PCR 芯片。在楚天生物独特的体系设计下,使得所有 miRNA 可以在统一的条件下GX扩增。
主要特点:1. 为每个miRNA都设计专门的反转录茎环引物,解决了一种通用的茎环引物难以匹配所有miRNA的问题,以及miRNA分析相互干忧的问题,并且极大程度降低本底,提高准确性;
2. 优化反应条件,大大缩短检测时间,约1个小时即可在Roche 480 II上完成实验检测;
3. 提高检测灵敏度,线性范围高达10
6,应用低至50 ng exosome提取的总RNA,也能得到较好的实验结果!
2. 接受样品类型a) 组织样品(需提供≥100mg组织。必须保存在RNAlater或类似RNA保护溶液中);
b) 体外培养细胞(需提供≥10^6个细胞。必须保存在RNAlater或类似RNA保护溶液中);
c) 全血(需提供≥2ml全血);
d) 总RNA(需提供≥5ug total RNA);
e) 其他样品,请来电或邮件咨询。
所有类型样品必须用冰袋或干冰寄至公司。冰袋或干冰应足量,以确保样品寄至公司时,冰袋或干冰未完全融化。使用invitrogen品PaiTRIzol试剂,按以上指导方法邮寄样品,3天内不会影响RNA质量。
3. 服务内容① 引物设计与合成 由江苏楚天生物提供实验所需引物;
② RNA抽提纯化 在组织或细胞样品中加入TRIzol试剂(invitrogen),匀浆或裂解后抽提RNA;
③ 基因组DNA消化处理 使用DNA消化液消化基因组残余DNA,程度降低实验干扰;
④ RNA质量检测 使用Denovix DS-11超微量分光光度计测定样本RNA浓度和纯度;
⑤ cDNA合成 使用江苏楚天生物专利开发的反转录试剂盒(含有针对每个miRNA专配的反转录茎环引物),将miRNA反转录为cDNA;
⑥ 实时荧光定量PCR检测 加入cDNA和反应液,在Roche 480 Ⅱ中进行扩增和检测;
⑦ 提交实验数据和报告 服务报告提交下列数据:实时荧光定量PCR扩增曲线;熔解曲线;基因表达定量结果分析,图表等。
4. 服务价格 服务名称 | 具体内容 | 价格 |
microRNA 实时荧光定量PCR检测 | 提供实时荧光定量PCR扩增曲线,熔解曲线,分析报告等 | 35元/孔位 |
5. 服务报告提交时间 收到样品后10-15个工作日。
欢迎登陆江苏楚天生物科技有限公司官方网站:www.ctbioscience.com 查询信息!或与我公司销售人员直接联系,咨询电话 0519-89886883!
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实时定量PCR技术服务指南--江苏楚天生物.pdf
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