项目 | 备注 |
动物 | 10只Balb/c小鼠或6只大鼠 |
弗氏佐剂 | 加弗氏完全佐剂进行初免,然后除终免外都加弗氏不完全佐剂进行免疫 |
免疫原 | 客户提供10mg或10mg以上纯化抗体。胃蛋白酶消化目标抗体,生产高纯度的F(ab')2片段作为免疫原,筛选杂交瘤细胞 |
免疫 | 免疫原用无菌盐水稀释并与佐剂混合,腹腔注射抗原与佐剂彻底混匀后形成的稳定乳状液,在免疫原提供持续的免疫应答基础上进行加强免疫 |
周期 | 第1天 | 采血0.2ml(获得0.1ml免疫前血清) 次免疫(抗原加弗氏完全佐剂) |
第14天 | 第二次免疫(抗原加弗氏不完全佐剂) |
第21天 | 采血和ELISA检测 |
第28天 | 第三次免疫(抗原加弗氏不完全佐剂) |
第35天 | 采血和ELISA检测 |
第42天 | 第四次免疫(抗原溶于PBS或盐水) |
第47天 | 细胞融合 |
细胞融合 | 采集血清样品,用目标抗体和无关的阴性对照抗体分别进行ELISA检测。用显示出预期免疫应答的小鼠进行细胞融合 |
扩增及筛选 | 96孔板培养融合细胞,用目标抗体和无关的阴性抗体进行ELISA检测,筛选阳性克隆,转入24孔板培养并鉴定亚类 |
亚克隆 | 阳性克隆用有限稀释法亚克隆至形成稳定的单克隆杂交瘤细胞。每个母细胞的两个亚克隆细胞株用培养瓶扩增,每个亚克隆细胞株冻存4~6支 |
鉴定 | 对阳性培养上清中获得的抗体进行亚类,相关反应性,特异性,抗原中和反应性和抗体配对等鉴定 |
交付 | 交付包括2瓶冻存的细胞或者每克隆提供1瓶活细胞及5ml培养上清 |