可用于任意目的基因的过表达,特别是3k以上的大基因。VP64是一个转录激活结构域,TALE-VP64结合到目的基因启动子序列上以后可以增强目的基因的转录水平来增加目的基因表达。
用TALE-VP64来进行过表达的优点:
1:可用于细胞内任意基因的过表达,所过表达的对象是细胞内源性的基因,没有其它的修饰和副产物的出现;
2:不受克隆和模板的限制,周期短,而有一些基因比如大基因,高GC含量基因,它们的克隆往往是很困难的;
3:不同的过表达TALE-VP64载体的表达增果会有差异,可以用来做表达强度效应的实验,得到目的基因激活程度不同工具或细胞群体。也可以通过结合不同TALE-VP64分子协同作用提高转录水平。
A,B,C,D分别代表设计的4种用于过表达的TALE-VP64人工转录因子,A+D为同时转染两者,在
293细胞中同时转染4种质粒可以激活基因表达10000多倍。
Perez-Pinera P et al. Synergistic and tunable human gene activation by combinations of synthetic transcription factors. Nat Methods. 2013 Mar;10(3):239-42.
用TALE人工转录因子过表达miRNA,紫色代表转录激活域为P65,绿色部分为VP64,miR1代表转染用于过表达的1号质粒,依次类推。将所有质粒同时共转染可以增强miRNA过表达250倍以上。
Maeder ML et al. Robust, synergistic regulation of human gene expression using TALE activators. Nat Methods. 2013 Mar;10(3):243-5.
服务内容:
针对目的基因设计并构建一套4个TALE-VP64载体,提供给客户50ug质粒实物及测序结果和报告。
载体选择:
我们提供带有不同荧光表达的载体用于构建,另有带有抗性载体可以进行筛选。