保存条件:
低温冷藏
供应商:
上海研生
保质期:
详见说明书
CAS号:
详见说明书
英文名:
LDH Cytotoxicity Assay Kit
数量:
27
规格:
100次|500次
操作步骤(仅供参考):
1、细胞毒性检测试剂盒(乳酸脱氢酶法)哪家好贴壁细胞的消化
①吸除培养液,用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5~2min, 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足,则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落, 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g 离心 1min,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称:细胞毒性检测试剂盒(乳酸脱氢酶法)哪家好
英文名称:LDH Cytotoxicity Assay Kit
产品规格:100次|500次发货周期:1~3天
本试剂盒也称乳酸脱氢酶检测试剂盒(LDHAssayKit)或乳酸脱氢酶释放检测试剂盒(LDHReleaseAssayKit),是一种基于diaphorase催化的INT显色反应,通过比色法检测细胞毒性时释放的乳酸脱氢酶活性或检测其它样品中的乳酸脱氢酶活性的试剂盒。本试剂盒可以用于常规的乳酸脱氢酶活性的检测,更常用于以LDH释放为指标的细胞毒性检测。同时,基于细胞总乳酸脱氢酶活性的检测,本试剂盒也可以用于检测细胞增殖和细胞毒性检测。细胞凋亡或坏死而造成的细胞膜结构的破坏会导致细胞浆内的酶释放到培养液里,其中包括酶活性较为稳定的乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase,LDH)。通过检测从质膜破裂的细胞中释放到培养液中的LDH的活性,就可以实现对细胞毒性的定量分析。LDH释放被看做细胞膜完整性的重要指标,并被广泛用于细胞毒性检测。LDH释放被认为是以前使用放射性的51Cr标记细胞,随后通过51Cr释放进行细胞膜完整性检测的安全有效的替代方法。本试剂盒的基本原理是,在乳酸脱氢酶的作用下,NAD+被还原生成NADH,NADH和INT(2-p-iodophenyl-3-nitrophenyltetrazoliumchloride)被硫辛酰胺脱氢酶(diaphorase)催化反应生成NAD+和强生色物甲臜(formazan),在490nm波长下产生吸收峰,从而可以通过比色来定量乳酸脱氢酶的活性。吸光度与乳酸脱氢酶活性成线性正相关。该酶联反应原理的示意图如下试剂盒组份(100次为例)LDH释放试剂——————1.5ml乳酸溶液———————2ml酶溶液————————1ml×2INT溶液(10X)—————0.2mlINT稀释液——————2ml储存条件-20℃,有效期一年【培养指南】
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类:
种:
是冻存产品,由液氮直接拿出,干冰运输给客户。一般不推荐这种,也较少使用这种方式,因为复苏手法对于细胞状态影响较大,一旦细胞状态不好,很难说是细胞自身不行,还是复苏没操作好;另外温度对细胞、基因功能状态影响很大,也不是细胞储存的Z好方式,快递时间也很难控制,多种因素影响产品的质量;干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种:
是我们复苏好细胞,QC通过后,T-25灌满培养基常温运输给客户,排除复苏造成影响,常温运输也对细胞影响也不大,只需加25元运费(顺丰)。
质量保证:我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,进口来源,保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作,不同的实验室采用的方法略有差异,但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
漆黄素二酸钠一水物/二酸盐一水物/二酸二钠盐一水物/Sodium malonate monohydrate 芹菜素二酸/胡萝卜酸/甜菜酸/缩苹果酸/烷二羧酸/烷二羧酸/Malonic acid 秦皮素内消旋-2,3-二溴二酸/2,3-二溴二酸/二溴二酸/α,β-二溴代琥珀酸/meso-2,3-Dibromosuccinic 素壬二酸/杜鹃花酸/1,7-壬二酸/庚烷-1,7-二羟酸/王二酸/Azelaic acid 双己二酸/1,6-己二酸/肥酸/Adipic acid 黄杨碱二酸铵/琥珀酸铵/二酸二铵/琥珀酸二铵/Ammonium succinate 桔皮素二酸钠/琥珀酸钠/二酸二钠/二酸二钠盐/琥珀酸二钠盐/Sodium succinate dibasic 基香酚二胺四酸四钠盐/EDTA四钠盐/EDTA tetrasodium salt 没食子酸辛酯氨镍/Nickel sulfamate 米力农1-氨基-8-萘酚-3,6-二磺酸钠/H酸单钠盐/4-氨基-5-羟基-2,7-萘二磺酸一钠/H酸一钠盐/1-氨基-8-萘酚-3,6-二磺酸单钠盐/H-酸钠盐/8-氨基-1-萘酚-3,6-二磺酸单钠盐/H acid monosodium salt
细胞毒性检测试剂盒(乳酸脱氢酶法)哪家好心脏微血管内皮细胞 规格20mg Mouse Cyclin D2 ELISA Kit冠状动脉内皮细胞 规格20mg Mouse Cyclin D1 ELISA Kit主动脉内皮细胞 规格20mg Mouse Cytochromo P450 ELISA KIT主动脉平滑肌细胞 规格100mg Mouse Cytochrome C ELISA Kit主动脉成纤维细胞 规格100mg Mouse ICAM-3 ELISA Kit心肌细胞 规格50mg Mouse ICAM-2/sCD102 ELISA Kit心肌细胞- 规格20mg Mouse ntercellular adhesion molecular 1, ICAM-1,CD54 ELISA KIT心脏成纤维细胞 规格20mg Mouse Motilin ELISA Kit心脏成纤维细胞-心室 规格20mg Mouse microalbunminuria ELISA KIT心脏成纤维细胞-心房 规格20mg Mouse DPD ELISA Kit角膜上皮细胞 规格20mg Mouse DHEA-S-7 ELISA Kit角膜细胞 规格20mg Mouse DHEA ELISA Kit视网膜内皮细胞 规格20mg Mouse HA ELISA Kit视网膜色素上皮细胞 规格20mg Mouse HCY ELISA Kit晶状体上皮细胞 规格20mg Mouse Glycogen phosphorylase MM ELISA Kit
温馨提示:不可用于临床ZL。