产品描述Lymphoprep™ 是一种无菌的,经过内毒素检测的可以分离出纯的淋巴细胞的成品。成分包括泛影酸钠(Sodium Diatrizoate)和多聚糖
(polysaccharide),浓度如下:
泛影酸钠 9.1% (w/v)
多聚糖 5.7% (w/v)
理化性质:
密度 1.077 ± 0.001 g/ml
渗透压 290 ± 15 mOsm
分离原则Z常用于分离白细胞的技术是通过复合物来凝集血液中的红细胞,从而增加他们的沉降速率。而白细胞的沉降速率几乎不被影响,通过离心就可以将红细胞和复合物沉降,并可以收集离心管上半部分的白细胞。Bøyum (1968) 通过甲泛影酸钠(sodium metrizoate)和多聚糖(polysaccharide)的混合,发展出了一种一步离心分离淋巴细胞的方法。Thorsby and Bratlie (1970) 将这种技术稍加修改后,纯化出淋巴细胞用于细胞毒性测试及细胞培养。其他科学家,如Harris和Ukayiofo (1969), Ting 和Morris (1971)分别使用该技术分离了尸体中的血液和在室温中保存超过6 小时的抗凝的血液,并证明了这是一种可靠地、简单的、快速分离淋巴细胞的方法。稳定性和储存条件Lymphoprep™ 在无菌和避光的条件下可以稳定保存3年。持续暴露在光照中会导致泛影酸钠中碘离子的分离。在日常使用过程中,这种影响可以忽略不计。Lymphoprep™ 的储存温度在+4oC~+30oC。分离步骤 (见右图) - 用离心管收集抗凝血液(EDTA,肝素,酸性的柠檬酸葡萄糖)或者脱纤血液。
- 用等量的0.9% NaCl稀释血液。
- 在12–15 mm的离心管中加入3 ml Lymphoprep™ ,并缓慢小心的加入6 ml 稀释好的血液,避免血液和分离液的混合,分离液应在下层, 盖上盖子避免气溶胶的形成。
- 室温下(大约20°C),在水平转子中800 x g 离心20分钟。如果血液储存超过2小时,增加离心时间到30分钟。
- 如图所示,离心后,将会有明显的单细胞层,不用弃去上层液体,用巴斯德管小心的吸取细胞层。
- 用0.9% NaCl 稀释获得的淋巴细胞,250 x g 离心10分钟,弃上清,收集细胞。
纯度和活性上面描述的方法可以快速,简单可靠的分离正常人和大部分病人的血液样本,并且效果显著。这项技术也可以分离其他淋巴细胞混合液中的淋巴细胞。淋巴细胞悬液中的红细胞数量通常占总细胞数的1%~5%。在强烈的免疫YZZL后,一些不成熟的粒细胞会混入淋巴细胞中。当使用肝素化的血液时,有必要先去除大多数的血小板,避免在细胞毒性测试中的YZ效应。上面提到的清洗步骤通常是足够充分的。
温馨提示:不可用于临床ZL。
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