人多能干细胞条件培养基

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产品特性
●无需饲(滋)养层（细胞）。
●成分明确，批间差小。
●适用于Essential 8系统培养的人类多能干细胞。
●无外源动物成分，大大降低各类病毒、霉菌和支原体等的污染风险。
 

产品内容

实验准备

2-8℃hPSC Condition Medium Supplement溶解后-20~ -80℃2）1:50比例将加入到  中混合均匀即成为。可在稳定储存周，不建议使用配制已超过周的人类多能干细胞条件培养基。

人类多能干细胞条件培养基人类多能干 (以下步骤皆应在无菌条件下操作)

hPSC实验前准备工作：

1.1  基质胶铺板、孵育及平衡：取出6孔板/12孔板，每孔内加入1 mL/0.5 mL，轻轻晃动6孔板/12孔板使基质胶完全盖皿375% CO_{培养箱中孵育1h~2h，在实验前拿出并置于超净工作台/生物安全柜中室温下平衡20min或2-8静置过夜备用。如果暂时不用，可用Parafilm封口后2-8注意：①干细胞复苏过程中的基质胶铺板数由冻存细胞密度决定，一支冻存的干细胞的密度在1×10^{cells/mL左右，需要6孔板铺1孔或12孔板铺2孔基质胶；②即用型基质胶人类多能干细胞条件培养基}}在实验前置于室温中避光平衡30min~1h。

1.3  超净工作台/生物安全柜照射紫外：在实验前打开紫外灯照射30min进行灭菌。

1.4  恒温水浴锅准备：水浴锅温度设置在372. 实验具体操作步骤：

2.1  提前加入人类多能干细胞条件培养基干细胞条件培养基℃温水中，快速摇动，使其在1~2min内快速解冻；

注意：细胞从液氮中拿出的速度要快，尽量减少其暴露在室温中的时间。

2.3  离心：冻存管中的冻存液解冻后，将其吸出并缓慢逐滴滴入提前在15mL离心管中加入的：离心后弃上清加1mL人类多能干细胞条件培养基对干细胞沉淀进行吹吸混匀，吹吸3~5次左右。

2.5  接种：吹吸均匀后，将已经平衡好的基质胶弃掉，缓慢吹吸15mL离心管中的细胞悬液，缓慢吹吸3~5次，待细胞悬液混匀后，加入到6孔板/12孔板中铺胶的孔内，且补全每孔2mL/1mL的培养体系。

2.6  培养：接种后的6孔板/12孔板可以置于倒置相差显微镜下观察接种的干细胞密度以及细胞团块大小，呈4个细胞以上的团块较合格，水平十字轻轻晃动6孔板/12孔板使细胞均匀分布。并置于375% CO  _{hSC细胞1. 实验前准备工作：}

1.1  基质胶铺板、孵育及平衡：h复苏中操作步骤。

1.2  实验试剂平衡：人类多能干细胞条件培养基人类多能干细胞无酶消化液2.  实验具体操作步骤：

2.1  清洗：拿出6孔板/12孔板弃去旧的人类多能干细胞条件培养基人类多能干细胞无酶消化液注意：消化时间依据干细胞生长密度，如果密度中等且培养2min~3min，若密度很大且培养4天以上消化时间可以控制在 min~5min，消化时间快结束时可以拿到倒置显微镜下观察细胞消化情况，若在显微镜下观察到大部分克隆边缘以及克隆内部细胞间出现间隙，即刻吸掉无酶消化液停止消化。

2.3  吹打：吸掉干细胞条件培养基，用移液枪扇形吹打培养皿底，吹吸次数保持在3~5次，使皿底贴附的干细胞集落脱落，轻柔缓慢吹吸混匀，制成干细胞悬液，并将其并转移到15mL离心管中；

即用型基质胶同PSC细胞；

2.6  换液：从传代的时间开始每24h换液一次。

hSC细胞1. 实验前准备工作：

1.1  实验试剂平衡： 、2. 实验具体操作步骤：

2.1  清洗：拿出6孔板/12孔板弃去旧的同PSC细胞消化同PSC细胞吹打 f细胞GX冻存液注意：冻存液即用即拿，及时放回4℃冰箱。通常生长状态相同且同时消化的细胞统称为一批细胞。

2.6  记录：在冻存管上标记冻存细胞种类、时间、操作者及细胞批次。

℃冰箱平衡：冻存管置于-80冰箱过夜。

℃冰箱过夜后，第2天将其置于液氮中进行长期保存。