供应商:
上海泽叶生物科技有限公司
数量:
20
英文名:
SHG-44(SHG44)
保质期:
二年
保存条件:
-80℃冻存
规格:
1x10^6 cells
细胞名称:SHG-44(SHG44)人胶质瘤细胞,人星形胶质细胞瘤细胞细胞英文(简称):SHG-44(SHG44)细胞来源: ATCC DSMZ JCM ECACC代次:P3规格:T25细胞数:1x10^6 cells组织来源:淋巴结
细胞形态:贴壁;成纤维细胞样
细胞活力:95%(Viability by Trypan Blue Exclusion)细胞检测细胞不含有:HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌培养条件:DMEM(高糖) +10% FBS;37℃,5% CO2传代方法建议:1:2-1:3 两天换液一次冻存条件:90%FBS+10%DMSO
传代细胞培养操作步骤1、 37度水浴加热所有试剂。2、 吸取培养培养皿内旧培养液,放置一个干净离心管内。(为稍后终止消化作准备。)3、 用PBS清洗培养皿,弃去。4、 向瓶内加入消化液(胰蛋白酶液)。以能覆盖培养瓶底为宜。(一般一个大皿1ml)5、 2-5分钟后,轻轻震荡培养皿。使SHG-44(SHG44)人胶质瘤细胞,人星形胶质细胞瘤细胞从瓶壁脱离形成细胞悬液。显微镜下观察若细胞由贴壁变为悬浮就加入血清(即原培养液)终止消化。6、 收集细胞悬液,880转/分、5分钟离心,弃去上清液。7、 加培养液至1ml,混匀后取10ul计数细胞。8、 根据实验要求取适量细胞留种或接种于新的培养皿或96孔板、24孔板中,再加入相应体积的培养液。(90mm大皿是9ml,中皿好像是4mm,6孔板和小皿是2ml,96孔板是100ul)。9、 接种好的培养皿顺时针和逆时针各转三圈,使细胞排列均匀。10、 放入暖箱中继续培养。细胞计数步骤:1、将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板上.2、将细胞悬液吸出少许,用台盼兰溶液对被稀释后滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间。(台盼兰用于标记死亡细胞。)3、镜下观察,计算计数板八大格细胞总数,压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算:细胞数/ml=8大格细胞总数/ 8×2×10000细胞冻存与复苏:SHG-44(SHG44)人胶质瘤细胞,人星形胶质细胞瘤细胞冻存和复苏的原则:慢冻快融当细胞冷到零度以下,可以产生以下变化:细胞器脱水,细胞中可溶性物质浓度升高,并在细胞内形成冰晶。如果缓慢冷冻,可使细胞逐步脱水,细胞内不致产生大的冰晶;相反,结晶很大,大结晶会造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融,目的是防止小冰晶形成大冰晶,即冰晶的重结晶。 1.冻存细胞(1)选对数增生期细胞,在冻存前1d换液。(2)按常规方法把培养细胞制备成悬液,计数,使细胞密度达5×106/m1左右密度,离心,去上清。(3)加入配制好的冻存液(培养液6.8ml,小牛血清2ml,DMSO 1ml,5.6%NaHCO3 0.1ml),按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中,然后用吸管轻轻吹打令细胞成再悬液。冻存细胞时培养液中加入保护剂10%二甲基亚砜(DMSO) 或甘油,它是一种渗透性保护剂,可迅速透入细胞,提高胞膜对水的通透性,降低冰点,延缓冻结过程,能使细胞内水分在冻结前透出细胞外,在胞外形成冰晶,减少胞内冰晶,从而减少冰晶对细胞的损伤(4)分装于无菌冻存管中,每管加1.5m1悬液。(5)旋好冻存管并仔细检查,一定要盖紧,作好标记。(6)冻存:在特殊的仪器或简易的液氮容器中,按-1℃/min的速度,在30~40 min时间内,下降到液氮表面,再停30 min后,直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度,过快能影响细胞内水分透出,太慢则促进冰晶形成。标准程序:当温度在-25℃以上时, 1~2℃/min当温度达-25℃以下时, 5~10℃/min当温度达-100℃时,可迅速放入液氮中简易程序:将冷冻管(管口要朝上)放入纱布袋内,纱布袋系以线绳,通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口,按每分钟温度下降1~2℃的速度,在40分钟内降至液氮表面,停30分钟后,直接投人液氮中。 操作时应戴防护眼镜和手套,以免液氮冻伤。2. 复苏细胞(1)从罐中取出冻存管。(2)迅速放入37℃水浴,不时摇动,使其急速融化,30~60s内完成。(3)冻存管用70%酒精擦拭消毒后,打开盖子,用吸管将细胞悬液注入离心管中,再滴加10 m1培养液。(4)SHG-44(SHG44)人胶质瘤细胞,人星形胶质细胞瘤细胞低速离心(880r/min) 5 min,去上清后再用培养液洗一次。(5)用培养液适当稀释后,装入培养瓶37℃培养,次日更换一次培养液后,继续培养。以后仍按常规进行培养。 冻存细胞数量要充分,密度应达到107/m1,在融后稀释20倍后,仍能保持5×105/m1数量。 ECACC细胞库 | 87032604 | MPK | 90020805 | TB1 Lu (NBL-12) | 92121114 | L6.G8.C5 | 96042326 | EMT6/AR10.0 | 1092505 | B95a |
ECACC细胞库 | 87032605 | CV-1 | 90021502 | CCF-STTG1 | 93010723 | V79-4 | 96042327 | EMT6/AR1 | 2050101 | MDCK-Protein Free |
ECACC细胞库 | 87042203 | RAB-9 | 90021504 | MCA-RH 7777 | 93011414 | RN 22 | 96042328 | NCI-H69/CPR | 2091238 | HCA-7 Colony 29 |
ECACC细胞库 | 87042204 | G-401 | 90021901 | MOLT-3 | 93011415 | RT4-D6P2T | 96042329 | NCI-H69/LX4 | 2111901 | MOCHA |
ECACC细胞库 | 87042205 | Detroit 562 | 90022302 | SK-N-MC | 93012901 | NBT-II | 96042330 | NCI-H69VCR/R | 3061601 | NS0-Serum-Free |
ECACC细胞库 | 87042206 | 6-23 (clone 6) | 90030801 | SV-T2 | 93020513 | A.704 | 96042331 | NCI-H69/LX10 | 3071601 | Rolf B1.T |