一、初始设置
收到蛋白循环反应仪后,请仔细检查外包装,确保在运输过程中未收到损坏。如果有损坏迹象,立即通知承运人,并提出索赔。某些运营商在交付的一定时间内,必须承担赔偿费用。
1.包装内容
打开集装箱检查的内容(见表1)。遗失物品报告。
表1 包装清单
项目 | 内容 | 数量 | 规格 |
1 | 蛋白循环反应仪 | 1 | 宽 cm 高 cm 长 cm 重 kg |
2 | 产品说明书 | 1 | |
3 | 电源线 | 1 | 电流 |
¨ 警告
不要在危险环境下使用蛋白循环反应仪。
若有液体溢出,请立即清理,以防止电击。
如果有机械损坏的迹象,则不要继续使用仪器。
2.使用前须知
蛋白循环反应仪交付的所有主要组件已经组装,必须保持原有包装组件的情况下,返回原厂修理。
仪器请平放在实验台上,请勿倾斜放置或摆放在不平整的台面上。
“电源开关”位于该装置的左侧,此开关应处于“关”位置,连接电源线到仪器上,正确的插好插头,此时仪器就可以使用了。
3.可能需要的附加材料
(1)蛋白循环反应试剂盒:分为6组和12组两种型号。
(2)废液吸取真空泵。
(3)洗涤缓冲液:PBS或TBS缓冲液。
二、仪器原理
该蛋白循环反应仪采用的是本公司的核心技术——抗原-抗体循环反应技术,此技术能够大大地加快抗原-抗体结合速度。当用于YL检测中,可以缩短检测反应时间,增加检测灵敏度,使得快速检测更加快捷、准确。基于抗体-抗原的检测技术,如酶联免疫法(ELISA),穿流法(flow through),侧流免疫层析法(lateral flow immunoassay),一般都包括一个溶液中的抗原与固定在一个支持体上的抗体结合的过程。这一过程一般需几十分钟到几个小时才能完成。快速检测方法,如侧流免疫层析法,灵敏度低的一个重要原因就是抗原-抗体的不完全结合。循环反应技术通过抗原-抗体反复、快速接触,来实现充分、特异性的结合。图1为此技术的示意图。
图1通过抗原-抗体循环技术方法将抗原抗体进行化的结合
在此方法中,抗体被固定在一个硝酸纤维素膜或PVDF膜上,当抗原溶液与膜孵育时,抗原溶液在真空或压力作用下,以类似一个过滤过程穿过膜。在此过程中,抗原与抗体有效结合。这一过程被自动地重复多次以达到抗原-抗体的结合。因为这个循环过程非常快速,可以缩小抗原抗体反应所需时间。清洗过程也是以这种类似过程完成,非常有效地去除非特异性结合的抗原。运用抗原-抗体循环反应技术可以将抗原-抗体结合过程从几个小时缩短到几分钟,从而大大加快了蛋白质检测的速度。抗原-抗体循环反应技术保证了抗原-抗体的结合,从而提高了检测的灵敏度。
三、操作
请在操作机器前熟悉机器,所有的操作通过手动的电阻屏。
1.安装反应盒
将蛋白循环反应盒按照对应尺寸,安装在反应台上。
2.程序界面介绍
打开仪器开关即可进入以下界面,界面分为四个部分,分别是参数设置部分、状态显示部分、数值输入部分和控制键部分。
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(1)参数设置
a. Speed:设置反应台升降的快慢,设定范围为0—10,建议设定速度为2或3。
b. Distance:设置反应台升降的距离,设定范围为0—10,建议设定距离为5或6。
c. Cycles:设置反应台循环的次数,反应台上下往返一次为一个循环。
(2)状态显示
a. Time Stared:显示循环程序从开始运行到目前的时间。
b. Time Lapsed:显示离所有循环完成所需的时间。
c. Cycles Passed:显示当前已完成几次循环操作。
(3)数值输入
根据实验需要,点击数字输入相应的参数设定值,点击“<”可清除光标前一位的数字,点击“CE”可清除当前参数栏的所有数字。
(4)控制键:
a. Up:根据所设定的速度Speed,向上移动设定的距离Distance。
b. Down:根据所设定的速度Speed,向下移动设定的距离Distance。
c. Start:设定好三个程序参数后,点击此键开始循环程序。反应台必须位于初始位置才能使用此键。
d. Stop:暂停正在进行的循环程序,可以在任何时候暂停程序。
e. Resume:当一个操作程序开始运行后,因为某些原因您暂时停止了该操作,您可以从刚才停止的地方恢复,继续运行未完成的操作程序。
f. Reset:让机器回到初始状态, 只能在机器未运行时进行重置,机器运行期间不能进行重置。
注意:
¨ 打开机器后,请先将门关闭,再运行操作,以防夹手。
¨ 在循环程序进行的过程中,你可以随时暂停操作,也可随时恢复操作
3.具体操作
(1)设置运行参数
a. 点击Speed,设置反应台升降的速度,设定范围为0—10,建议速度设置为2—3。
b. 点击Distance,设置反应台升降的距离,设定范围为0—10,建议反应液体积为500ul时距离设置5或6。
c. 点击Cycles,设置循环反应次数,反应台升降一次为一个循环。
(2)运行程序
a. 设置以上参数后,点击Up或Down,可让反应台进行单次上升或下降(Distance的数值);
b. 点击Start,可让反应台进行已设定数量的循环;
c. 在反应台进行循环反应的过程中,出现任何问题可以点击Stop,立即暂停反应台的升降,如需继续程序可点击Resume;
d. 程序运行完成后,点击Reset,让机器回复到初始状态;
e. 反应的进行时间和已运行的循环次数可见界面上方右侧的三个状态栏。
4.举例
(1)加待测血清:将已包被捕获抗体的反应盒安装在机器上,加入待测血清500ul,设置Speed为2,Distance为5,Cycles为10。设置完成后点击Start开始循环反应。
(2)清洗:10次循环结束后,用废液吸取真空泵将废液吸去,再加入500ul PBS缓冲液,以同样的Speed和Distance,每次3个循环进行清洗,每次清洗完吸去废液,共清洗3次。
(3)加hrp溶液:再加入500ul含有标记hrp抗体的检测液,以同样的Speed和Distance进行10次循环。
(4)清洗:同第2步操作。
(5)显色:加入ECL化学发光底物或者TMB底物显色液,观察实验结果。
四、注意事项
1. 机器运行过程中,请勿将门打开,防止手被夹伤。
2. 为防止触电,非专业人员请勿打开机箱,否则会有电击危险。
3. 避免将设备暴露在日光直接照射下或其他热源处,以免损坏敏感元件。
4. 避免受潮或雷电所引致的损坏,勿将本产品暴露在雨中或过分潮湿处使用。
5. 如遇不正常现象出现时,应立刻停止使用本机。如:冒烟、声音异常或异味。
6.当您发现任何异常时,应立刻切断电源开关及拔掉电源插头。