甲基化检测（Sequenom平台）

Sequenom甲基化实验服务步骤
1、检测位点确认，根据目的片段和样品来源，在NCBI中对兴趣位点进行预测和标注。
2、反应方案和引物设计
3、 使用亚硫酸盐，将样本DNA 中没有甲基化的C 全部转化为U（相当于DNA 中的T） 。
4、使用特殊设计的一对引物扩增样本，得到带有T7 RNA 聚合酶启动子序列的扩增产物。
5、在体外转录体系中，利用T7 RNA 聚合酶，将扩增产物转录为RNA 片断。
6、在步骤3 的体系中，利用RNase A 能够特异性识别并切割RNA 中U 3’端的特性，将RNA 片
断切割成携带有CpG 位点的小片断。相同的片断中，
7、使用sequenom®MassArray 飞行质谱分析系统检测产物。由于同一片断中，只有CpG 和CpA之间16Da 的分子量差别，即质谱图中两者峰的差距。