说明书下载 CW0692 LAmp DNA Polymerase(5U/μl)
产品介绍 LAmp DNA Polymerase在具有5′-3′DNA聚合酶活性的同时具有3′-5′外切酶活性,是一种兼具高扩增效率和高保真性的耐热聚合酶。其主要特点是可以GX扩增长片段DNA,尤其在扩增>10 kb的DNA片段方面,其优势更加明显,所扩增的片段Z长可以达到40 kb。该酶具有高度的延伸和校对能力,保真度高于普通Taq酶。优化的缓冲体系使酶的应用更加广泛,即使以复杂的基因组DNA为模板,也可以保证很高的特异性和长片段的扩增。特有的PCR增强剂(C-Solution)使GC含量高,有二级结构和重复序列的复杂模板也能得到GX扩增。使用本制品扩增得到的PCR产物的3′端附有一个“A”碱基,因此可直接用于T/A克隆。适用于高保真度的长片段PCR扩增和复杂模板的PCR扩增,如构建基因图谱、序列测定及分子遗传学研究等。
PCR
反应体系 试剂 | 50 μl反应体系 | 终浓度 |
2×LAmp MasterMix | 25 μl | 1× |
Forward Primer,10 µM | 2 μl | 0.4 μM |
Reverse Primer,10 µM | 2 μl | 0.4 μM |
Template DNA | <1 μg | <1 μg/reaction |
RNase-Free Water | up to 50 μl | |
注意:引物浓度请以终浓度0.1-1.0 μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
PCR
反应条件 步骤 | 温度 | 时间 |
预变性 | 94℃ | 2 min |
变性 | 94℃ | 30 s |
退火 | 55-65℃ | 30 s |
延伸 | 72℃ | 40 s |
终延伸 | 72℃ | 5 min |
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃,无法得到理想的扩增效率时,适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件
。2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定,
本产品中所包含的LAmp DNA Polymerase的扩增效率为1 kb/40 s。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以,在保证产物得率的前提下,应尽量减少循环次数。
温馨提示:不可用于临床ZL。