免疫与生化 18项目
WB免疫检测、
免疫共沉淀IP/CoIP、
染色质免疫共沉淀CHIP、
凝胶电泳迁移实验EMSA检测、
NF-KB p65活性检测、
PKC活性检测、
组蛋白甲基化/磷酸化/乙酰化检测、
酪蛋白酶谱MMP(3/10) 、
明胶酶谱MMP(2/9)实验、
凋亡因子Caspase-3、8、9、1、2、4、6检测
ELISA检测、
酶活性检测、
抗氧化/自由基检测、
生化代谢检测
WB免疫检测：
Western blotting (WB)是在蛋白质凝胶电泳和固相免疫测定基础上发展起来的蛋白质检测技术，是将SDS-PAGE电泳分离的蛋白质样本转移到固相载体（硝酸纤维素NC膜，PVDF膜）上，以固相载体上的蛋白质作为抗原，与合适的抗体结合，再与酶标记的二抗结合，经过底物显色或放射自显影对蛋白质进行鉴定及定量的分析技术，其检测蛋白质的灵敏度为ng级，该技术广泛应用于医学、生物学研究领域。
基本步骤：
1.检测样本的准备（新鲜组织、细胞、血清、渗出液等），选择合适的WB抗体（单抗或多抗），实验前请与南科生物联系确认是否有合适的抗体可以提供使用，以避免不必要的重复购买抗体。
2.蛋白质样本制备，根据实验要求选用适当的裂解液，选择制备总蛋白、膜蛋白、浆蛋白或核蛋白，某些特殊的蛋白如线粒体蛋白则需要选用试剂盒进行制备提取，必要时对蛋白进行定量。
3.SDS-PAGE凝胶电泳分离蛋白，并将分离的蛋白转移到NC膜或PVDF膜上。
4.目标蛋白的免疫学检测（一抗和二抗的反应），ECL化学发光法或DAB显色法显示蛋白条带。
5.目的蛋白条带的定量分析，利用软件测定其光密度值IOD，并与内参蛋白条带IOD值进行比较分析，计算目的蛋白相对表达量。
免疫共沉淀IP/CoIP；
免疫共沉淀（Co- Immunoprecipitation, Co-IP）是研究细胞内蛋白质与蛋白质相互作用的一种技术，用抗体将相应特定分子沉淀的同时，与该分子特异性结合的其他分子也会被带着一起沉淀出来的技术。这种技术常用于验证蛋白质之间相互特异性结合。
免疫共沉淀原理：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质A的抗体去结合并沉淀A蛋白，那么与A在体内结合的蛋白质B也能同时沉淀下来，两种蛋白通过Protein A或G形成复合物“蛋白B—蛋白A—抗A蛋白抗体—Protein A/G”，上述复合物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳被分开，以免疫印迹WB或质谱检测目的蛋白。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合，也可用于确定一种特定蛋白质可能的新关联蛋白。
免疫共沉淀优点
1）相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的，处于天然状态；
2）蛋白的相互作用是在自然状态下进行的，可以避免人为的影响；
3）可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。
免疫共沉淀缺点
1）可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质－蛋白质相互作用；
2）两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而可能有第三者在中间起桥梁作用；
3）必须在实验前预测目的蛋白是什么，以选择检测的抗体，所以，若预测不正确，实验就得不到结果，此方法具有一定的风险性。
染色质免疫共沉淀CHIP：
真核生物的基因组DNA以染色质的形式存在，研究蛋白质与DNA在染色质环境下的相互作用是阐明真核生物基因表达机制的基本途径。与传统的EMSA技术相比，染色质免疫沉淀技术（CHIP）能真实完整地反映结合在DNA序列上的调控蛋白，是目前研究体内DNA与蛋白质相互作用的方法。
基本原理是在活细胞状态下以甲醛固定蛋白质－DNA复合物，超声将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后加入目的蛋白抗体，通过抗体沉淀靶蛋白-DNA复合物，通过洗脱的方法得到富集的靶蛋白-DNA复合物，特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段，通过对目的片断的纯化与检测（PCR分析），从而获得蛋白质与DNA相互作用的信息。
该技术主要应用于：1.组蛋白修饰研究 2.转录调控分析 3.药物开发研究 4.有丝分裂研究 5.DNA损伤与凋亡分析。
基本步骤：
1）甲醛处理细胞
2）收集细胞，超声破碎
3）加入目的蛋白的抗体，与靶蛋白-DNA复合物相互结合
4）加入ProteinA，结合抗体-靶蛋白-DNA复合物，沉淀
5)对沉淀下来的复合物进行清洗，除去一些非特异性结合
6)洗脱，得到富集的靶蛋白-DNA复合物
7)解交联，纯化富集的DNA-片断
8)PCR或基因芯片分析。
凝胶电泳迁移实验EMSA检测：
凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA-electrophoretic mobility shift assay）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。当检测如转录调控因子一类的DNA结合蛋白，可用纯化蛋白，部分纯化蛋白或核蛋白提取物。在检测RNA结合蛋白时，依据目的RNA结合蛋白的位置，可用纯化或部分纯化的蛋白，也可用细胞核或胞质提取物。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段（特异）和其它非特异片段，来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性。
NF-KB p65活性检测：
NF-KB p65磷酸化（活化形式）以后存在于细胞核内，可以直接和胞核内某些因子或基因启动子结合，启动一序列生理或病理生理效应。本方法通过提取组织或细胞核蛋白，利用不同形式的NF-Κb p65抗体捕获细胞核蛋白并加以区分，通过酶标仪450nm处测定核蛋白标准品与NF-Κb p65吸光度值，进行定量比较，从而明确p65蛋白的活化度。
标本收集与保存：
组织样品 新鲜组织放入液氮或-70度保存，组织不少于100mg；
培养细胞 通过细胞计数取不少于2×106个细胞于EP管，加入0.5ml生理盐水，混匀后保存于冰箱（-70℃，避免反复冻融）；
血液细胞标本 以抗凝管保存血样或以淋巴细胞分离液分离细胞后加入0.5ml生理盐水，保存（-70℃可长期保存，避免反复冻融）
血清或细胞培养液标本 离心去掉杂质后取上清入EP管，保存（4℃可保存15-20天，-70℃可长期保存，避免反复冻融）
PKC活性检测：
通过非放射性技术，将PKC蛋白（磷酸化蛋白及非磷酸化蛋白）分离并加以区分，利用电泳琼脂糖凝胶技术显示2种不同的蛋白，将显示的不同蛋白定量并加以比较，以p-PKC与PKC灰度值IOD的比值显示PKC活性（PKC活化度）。
组蛋白甲基化/磷酸化/乙酰化检测：
本检测包括甲基化组蛋白H3K4、甲基化组蛋白H3K9、甲基化组蛋白H3K27、组蛋白H3磷酸化(Ser10)检测、组蛋白H3磷酸化(Ser28)检测、组蛋白H3乙酰化检测、组蛋白H4乙酰化检测等。
本方法基于特异性抗体检测组蛋白各组分，通过比色定量的方法得出各组分的含量。
酪蛋白酶谱MMP(3/10) ：
本方法采用酶谱法(zymography)检测MMP-3/10活性，Zymography是一种基于SDS-PAGE电泳的蛋白酶检测方法，其灵敏度可达1 nM (10~100 pg)，高于ELISA方法。通过制备加有胶原酶底物的SDS-PAGE凝胶，含蛋白酶的样品在凝胶进行电泳，电泳结束后取出凝胶与酶反应Buffer孵育，凝胶进行考马斯亮蓝染色与脱色。凝胶中由于含底物蛋白而被深染，形成深色背景，但在有蛋白酶条带的位置，蛋白酶将降解凝胶中的底物蛋白，因而不被染色而形成透亮区域，从而能同时指示MMP-3/10的大小位置(酶谱)及活性。
样品准备要求：
1）血浆/血清/上清或体液样品准备：血浆或血清样本加入1/10体积的柠檬酸钠，1000rpm离心20分钟，留取上清，以BCA法测定蛋白浓度，测定浓度以后，取约30ug蛋白上样进行电泳检测。样本准备后可暂时4℃保存，不立即测定的样品需-70℃保存，但不宜超过10天。
2）组织样本准备：取100mg新鲜组织以2ml匀浆液进行匀浆（匀浆剂：0.1M Tris/ HCl/pH 7.4 ,0.5% TritonX-100，0.1mg/ml PMSF），12000g 4℃离心5分钟，移取上清层至另一新的1ml离心管待测，取30ug蛋白上样进行电泳检测。样本准备以后，样品可暂时4℃保存，不立即测定的样品需-70℃保存，但不宜超过10天。
3）细胞样本准备：取1个6孔板细胞（每孔细胞量约2×106个细胞），离心后以500ul匀浆液进行超声匀浆（匀浆剂：0.1M Tris/HCl/pH 7.4 ,0.5% TritonX-100，0.1mg/ml PMSF），12000g 4℃离心5分钟，移取上清层至另一新的1ml离心管待测，取30ug蛋白上样进行电泳检测。样本准备以后，样品可暂时4℃保存，不立即测定的样品需-70℃保存，但不宜超过10天。
明胶酶谱MMP(2/9)实验：
酶谱法（Zymography）是基于SDS-PAGE电泳和反相凝胶染色的蛋白酶检测方法检测MMP-2、MMP-9活性，其灵敏度可达10pg，高于ELISA方法。其基本原理和程序是：以加有胶原酶底物的SDS-PAGE凝胶分离含蛋白酶的样品，电泳结束后取出凝胶与酶反应Buffer孵育，凝胶染色与脱色。凝胶中由于含底物蛋白而被深染，形成深色背景，但在有蛋白酶条带的位置，蛋白酶将降解凝胶中的底物蛋白，因而不被染色而形成透亮区域，能同时指示MMP-2、MMP-9的位置(酶谱)，可检测样本有血液、渗出液、细胞提取物等。
凋亡因子Caspase-3/8/9检测：
Caspase3
Caspase是一个在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase3也称CPP32，是细胞凋亡过程中的一个关键酶，可以剪切procaspase 2、6、7和9，并可以直接特异性剪切许多caspase底物，包括PARP (poly(ADP-ribose) polymerase)，ICAD (Inhibitor of caspase-activated Deoxyri- bonuclease)，gelsolin和fodrin等。这些由caspase 3介导的蛋白剪切是细胞凋亡分子机制的重要组成部分。caspase 3在细胞核凋亡过程中也起到了关键作用，包括染色质固缩，DNA片段化等。同时caspase 3对细胞起泡(Cell blebbing)也起到关键作用。
检测原理基于casepase 3可以催化底物Ac-DEVD-pNA产生黄色的pNA (p-nitroaniline)，从而可以通过测定吸光度来检测caspase 3的活性。pNA在405nm附近有强吸收。参照黄色产物pNA制作的标准曲线，可以作为定量caspase 3酶活性的标准品。
Caspase-8
Caspase 8通常以酶原的形式存在，在细胞凋亡的信号转导过程中被激活，Caspase 8被认为是细胞凋亡信号转导过程中上游的caspase，在Fas-receptor和TNFR-1介导的细胞凋亡过程中caspase 8被激活，形成一个由p18和p10组成的二聚体，进一步激活下游的caspase 4，caspase 6，caspase 9和caspase 10。
本方法基于Caspase 8可以催化底物Ac-IETD-pNA产生黄色的pNA (p-nitroaniline)，从而可以通过测定吸光度来检测Caspase 8的活性。pNA在405nm附近有强吸收。 检测样本的405nm OD值参照pNA制作的标准曲线，可以计算样品的Caspase 8酶活性。
Caspase-9
Caspase 9也称ICE-LAP6
或Mch6，是细胞凋亡信号转导过程中上游的caspase。线粒体释放细胞色素c以后，caspase 9可以和细胞色素c以及Apaf1形成复合物，同时被激活。激活的caspase 9可以激活细胞凋亡的Z关键酶caspase 3，从而促进后续的细胞凋亡信号。Caspase 9的激活可以通过磷酸化进行调控。
本方法基于Caspase 9可以催化底物Ac- LEHD -pNA产生黄色的pNA (p-nitroaniline)，从而可以通过测定吸光度来检测Caspase 9的活性。pNA在405nm附近有强吸收。 检测样本的405nm OD值参照pNA制作的标准曲线，可以计算样品的Caspase 9酶活性。
凋亡因子Caspase-3/8/9检测样本准备：
1）细胞样品：取1×107个细胞（约1个T25的培养瓶细胞量），600g 4℃离心5分钟收集细胞，小心吸除上清，PBS洗涤一次。吸取上清后，每管细胞样品加入100ul裂解液重悬沉淀，冰浴裂解15分钟。4℃ 16,000g离心10-15分钟，把上清转移到冰浴预冷的离心管中。立即测定caspase 3的酶活性或-70℃保存样品。同时可以取少量样品用Bradford法测定蛋白浓度，尽量使蛋白浓度达到1-3mg/ml。
2）组织样品：约每10mg组织加入100ul裂解液，在冰浴上用玻璃匀浆器匀浆。然后把匀浆液转移到1.5ml离心管中，冰浴再裂解5分钟。4℃ 16,000g离心10-15分钟，把上清转移到冰浴预冷的离心管中。立即测定caspase 3的酶活性或-70℃保存样品。同时可以取少量样品用Bradford法测定蛋白浓度，尽量使蛋白浓度达到1-3mg/ml。
ELSIA检测
酶联免疫吸附试验 (以下简称ELISA)是酶免疫测定技术中应用Z广的技术。ELISA方法的基本原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合，此种结合不会改变抗体的免疫学特性，也不影响酶的生物学活性。此种酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色的氧化型，出现颜色反应。因此，可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应，颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。此种显色反应可通过ELISA检测仪进行定量测定，这样就将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合起来，使ELISA方法成为一种既特异又敏感的检测方法，常用的 ELISA 法有双抗体夹心法和间接法，前者用于检测大分子抗原，后者用于测定特异抗体。
检测样本范围：细胞培养液、血液、血清、腹水、分泌物、提取物、组织或细胞匀浆等。
酶活性检测:
酶活性检测检测指标包括超氧化物歧化酶SOD、CuZn+Mn-SOD、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、谷胱甘肽还原酶(GR) 、过氧化氢酶（含过氧化氢H2O2检测）、碱性磷酸酶(ALP)、酸性磷酸酶(AP)、髓过氧化物酶MPO、DNA甲基化转移酶活性(DNMT)、凋亡因子家族酶Caspase-3/8/9等。
超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase, SOD）又称过氧化物歧化酶。SOD属于金属酶，按照结合金属离子种类不同，该酶有以下三种：含铜与锌超氧化物歧化酶（CUZNSOD）、含锰超氧化物歧化酶（MN—SOD）和含铁超氧化物歧化酶（Fe—SOD）。SOD主要存在于胞液和线粒体基质中，是防御生物体氧化损伤的一种十分重要的酶。它的作用底物是超氧阴离子自由基O2-，可将其催化歧化为氧气和过氧化氢。这种酶在保护生物细胞免受超氧自由基和由其形成的活性氧类（例如H2O2,·OH）的毒害方面起着重要作用。SOD超氧化物歧化酶检测方法基于通过黄嘌呤（Xanthine）/黄嘌呤氧化酶（XOD）体系生成超氧化物阴离子。加入发色基团，发色基团可被由上述体系产生的氧化物阴离子还原成为水溶性的黄色甲染料，这样SOD活性通过YZ发生基团的还原来测定。
谷胱甘肽还原酶（glutathione reductase, GR）是一种利用NADPH将氧化型谷胱甘肽（GSSG）催化反应成还原型（GSH）的酶。在动植物组织、微生物、酵母中均可以见到。反应是不可逆的。一经透析便会失活，通过添加Mg2+或M2+n使之活化。鼠肝脏的酶几乎只能利用NADP作为补酶，但是在人的红血球的酶也利用NAD进行作用。对胱氨酸和高胱氨酸均无作用。谷胱甘肽还原酶催化NADPH依赖的GSSG还原成GSH的反应对维持胞内足够水平的GSH的GSH氧化还原循环起着重要作用。胞内必须维持高比例的GSH/GSSG来对抗氧化胁迫。本方法在检测过程中，GR还原GSSG生成GSH，GSH与5,5’-二硫基（2-对苯甲酸）（DTNB）反应，产生TNB2-（λmax=405nm），检测灵敏度可达检测0.1-40 mU/ml。
过氧化氢酶是一种普遍的抗氧化酶，广泛存在于几乎所有的生物体内。其功能是催化过氧化氢的分解，产物为水和氧气。依据本方法检测过程中，过氧化氢酶首先将H2O2分解为水和氧，未被分解的H2O2与OxiRed™探针结合，在570 nm波长处可以检测到信号改变，样本中过氧化氢酶的含量与OD读数成反比，根据OD读数以及标准曲线可计算出样本中所含过氧化氢酶的含量。
碱性磷酸酶（ALP）是一种在碱性条件下具有较强活性的水解酶，广泛分布于人体各脏器器官中，并以多种形态存在于血液中，其大多来自肝脏和成骨细胞，其次为肾脏、胎盘、肠、睾丸、胸腺、肺、胎盘及肿瘤。碱性磷酸酶不是单一的酶，而是一组同功酶。血清中的ALP主要来自肝脏和骨骼。生长期儿童血清内的大多数来自成骨细胞和生长中的骨软骨细胞，少量来自肝。碱性磷酸酶水平的变化与肝脏和骨骼的各种病理状态有关。在儿童生长期和妊娠期，血清中ALP生理性活性ZG，骨疾病与肝胆疾病等引起ALP病理性活性ZG。在肝胆疾病中引起ALP活性ZG的原因包括胆道梗阻，例如因胆结石、肿瘤或炎症造成的胆汁郁积。在传染性肝炎中也可发现ALP活性ZG。在骨疾病中，Paget病、骨软化症（佝偻病）、骨转移瘤和甲状旁腺功能亢进等，使成骨活性升高引起ALP活力ZG。本方法利用磷酸对硝基苯酯磷酸（pNPP）作为磷酸酶的底物，当其被磷酸酶去磷酸化后呈黄色，在405nm处，测定吸光度可计算出样本中碱性磷酸酶的活力。
髓过氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)又称过氧化物酶，是一种重要的含铁溶酶体，存在于髓系细胞(主要是中性粒细胞、单核细胞和某些巨噬细胞)的嗜苯胺蓝颗粒中，是髓细胞的特异性标志，随着对MPO研究的深入，人们发现MPO基因多态性导致个体对一些疾病易感性的差异，与人类多种疾病的发生、发展密切相关。MPO的主要功能是在吞噬细胞内杀灭微生物，利用过氧化氢和氯离子产生次氯酸盐，并形成具有氧化能力的自由基。构成MPO–H2O2–卤素系统。许多研究发现，MPO不仅能杀灭吞噬于细胞内的微生物，而且可释放到细胞外，破坏多种靶物质，如肿瘤细胞、血小板、NK细胞、原虫、毒素等，对机体产生和调节炎症反应等多方面发挥作用。然而，在特定条件下，MPO催化反应生成过量的氧化剂(HOCl、3–氯化酪氨酸、酪氨酰基、硝基酪氨酸等)，超过局部抗氧化剂的防御反应时，就会导致氧化应激和氧化性组织损伤。MPO还参与调节炎症反应的许多过程，MPO缺陷的中性粒细胞因过量的注入炎症部位而发生氧化反应，大量的超氧化物和氧化物形成，造成炎症部位组织细胞损伤。此外还有学者发现MPO能与DNA牢固结合形成复合物，有效保护DNA防止其在氧化过程中受损，从而保证髓系细胞的正常分化成熟及功能。本检测利用MPO催化H2O2和Cl-产生次氯酸，次氯酸与牛磺酸反应形成牛磺酸氯胺，后者与相应的探针结合可以在412 nm被检测到信号的原理检测MPO的含量，可以检测到0.05 mU/每样本含量的MPO。
抗氧化/自由基检测
本检测指标包括总谷胱甘肽、还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽 (GSSG)、活性氧ROS、丙二醛MDA、TAC总抗氧化能力、超氧化物歧化酶SOD、CuZn+Mn-SOD、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、谷胱甘肽还原酶(GR)、过氧化氢H2O2、过氧化氢酶等检测。
谷胱甘肽 (GSSG+ GSH)检测基本原理：通过谷胱甘肽还原酶把氧化型谷胱甘肽(GSSG)还原成还原型谷胱甘肽(GSH)，而GSH可以和生色底物DTNB反应产生黄色的TNB和GSSG。适当配制反应体系，前后两个反应合并起来后，总谷胱甘肽(GSSG+GSH)就相当于一个颜色产生的限速因素，总谷胱甘肽的量就决定了黄色的TNB形成量。从而通过测定A412就可以计算出总谷胱甘肽的量。还原型谷胱甘肽是绝大多数活细胞中巯基的主要来源，对于维护蛋白巯基适当的氧化还原状态有重要作用，并且是动物细胞中关键的抗氧化剂，总谷胱甘肽中通常90-95%为还原型谷胱甘肽。
活性氧ROS利用荧光探针DCFH-DA进行活性氧的检测。DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF，检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。
丙二醛MDA (Malondialdehyde)是一种生物体脂质氧化的天然产物。动物或植物细胞发生氧化应激(oxidative stress)时，会发生脂质氧化。一些脂肪酸氧化后逐渐分解为一系列复杂的化合物，其中包括MDA。此时通过检测MDA的水平即可检测脂质氧化的水平，因此MDA的测定被广泛用作脂质氧化的指标。生物体内的一些其它生化反应也会产生MDA，例如thromboxane synthase也可以催化产生，但只要在测定时设置适当对照即可观察到脂质氧化水平的变化。通过比色法对血浆、血清、尿液、动植物组织或细胞裂解液中MDA进行定量检测，血浆、血清样品中的MDA含量通常在约2-4µM，尿液中的MDA含量通常在约1-2µM。
TAC总抗氧化能力，抗氧化剂在阻止自由基的形成和自由基清除以及其他潜在的毒性氧化物中有重要作用。抗氧化剂有三种类型：酶系统（GSH还原酶、过氧化氢酶、过氧化物酶等）、小分子（抗坏血酸、GSH、维生素E等）和蛋白（白蛋白、转铁蛋白等）。不同的抗氧化剂其还原力不同。Trolox用作抗氧化剂的标准，以相当于Trolox的抗氧化能力来表示。检测体液和其他样品中结合的非酶抗氧化能力可以提示总的清除活性氧自由基、抵抗氧化损伤和抗击氧化胁迫相关疾病的能力。某些情况下蛋白起作用，其他时候抗氧化需要小分子。小分子和蛋白都可以将Cu++转化成Cu+，蛋白mask可防止Cu++被蛋白还原，只分析小分子抗氧化剂的还原力。Cu+与显色探针螯合，在570nm有一个吸收峰，吸收值与抗氧化能力成正比。利用标准曲线即可计算出TCA总抗氧化能力。
超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase, SOD）又称过氧化物歧化酶。SOD属于金属酶，按照结合金属离子种类不同，该酶有以下三种：含铜与锌超氧化物歧化酶（CUZNSOD）、含锰超氧化物歧化酶（MN—SOD）和含铁超氧化物歧化酶（Fe—SOD）。SOD主要存在于胞液和线粒体基质中，是防御生物体氧化损伤的一种十分重要的酶。它的作用底物是超氧阴离子自由基O2-，可将其催化歧化为氧气和过氧化氢。这种酶在保护生物细胞免受超氧自由基和由其形成的活性氧类（例如H2O2,·OH）的毒害方面起着重要作用。SOD超氧化物歧化酶检测方法基于通过黄嘌呤（Xanthine）/黄嘌呤氧化酶（XOD）体系生成超氧化物阴离子。加入发色基团，发色基团可被由上述体系产生的氧化物阴离子还原成为水溶性的黄色甲染料，这样SOD活性通过YZ发生基团的还原来测定。
生化代谢检测
本检测指标包括一氧化氮NO、ADP定量检测、ATP定量检测、ADP+ATP比率分析、DNA损伤定量分析、NAD+NADH定量、NADP+NADPH定量、钙离子(Ca)含量、铁离子含量、镁离子含量等检测。
ADP是ATP脱磷酸后的产物，增加一个磷酸基团即转变成ATP。在ATP与ADP之间的转化过程中，多种磷酸(酯)酶、磷酸化酶以及激酶均参与其中。ADP在体内通常储存于血小板中，在释放后可以与各种嘌呤能受体发生作用。ADP的水平调控着多种参与中间代谢的酶分子。ADP转换成ATP通常发生在线粒体/叶绿体，当然胞浆中也经常发生类似的转换。传统的方法是，使用荧光素酶/荧光素介导的方案来检测ADP的水平。然而，荧光素酶系统不是很稳定，并且其检测设备也不是很普遍，这在一定程度上限制了实验室里ADP的检测。
本检测基于ADP比色法检测ADP，将样本内的ADP转化成ATP和丙酮酸，丙酮酸可以用比色法(λmax = 570 nm)定量。该方法简捷、敏感、稳定，并适用于高通量分析，其在生物样本内的检测灵敏度可以达到1μM ADP。
ATP是生物代谢系统的能量货币。几乎所有的能量依赖性生化反应都要利用储存在ATP高能磷酸键里面的化学能。ATP只在线粒体中合成，许多遗传疾病都会影响线粒体中ATP的合成反应。本检测基于ATP比色法检测ATP，操作简易方便。将甘油磷酸化后会生成一种产物，该生成物能通过测定比色法（λmax=570 nm）定量。其检测技术的灵敏度可以达到50 picomol（1μM）。
NADH，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，,还原型辅酶Ⅰ。N指烟酰胺，A指腺嘌呤，D是二核苷酸。葡萄糖代谢时直接经代谢所产生的ATP是十分的少的，而代谢产生的NADH或FADH2经由一个电子传递与氧化磷酸反应可产生大量的ATP。NADH分子是线粒体中能量产生链中的控制标志物。NADH水平的上升指示代谢失衡的出现。监视NAD/NADH的氧化还原状态是表征活体内线粒体功能的参数。涉及到氧化还原的反应都与之有关，比如呼吸作用，光合作用，尤其是NADH。因此NAD/NADH水平的监控是能量传递、细胞核组织氧化还原态等研究的主要兴趣点。
本实验可以检测哺乳动物样本细胞内NADH、NAD的水平以及相互的比率。该NADH/NAD定量试剂盒内的NAD循环酶混合物特异性的识别酶循环反应中NADH/NAD，因此无需在分析前从样本内纯化NADH/NAD。并且NADH/NAD定量分析试剂盒只特异性的检测NADH/NAD，不会与NADP和NADPH有反应。通过提供的NAD循环酶混合反应体系可以大大提高检测的灵敏度和特异性。样本内NADH/NAD的含量可以通过与标准样相比而获得。
NADPH是一种辅酶，还原型辅酶Ⅱ(NADPH)，学名烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，在很多生物体内的化学反应中起递氢体的作用，具有重要的意义。还有NADP，是其氧化形式。常常存在于糖类代谢过程中。来自于维生素PP。NADPH通常作为生物合成的还原剂，并不能直接进入呼吸链接受氧化。只是在特殊的酶的作用下，NADPH上的H被转移到NAD+上，然后由NADH进人呼吸链。 NADPH是在光合作用光反应阶段形成的，与ATP一起进入暗反应，参与CO2的固定。NADPH的形成是在叶绿体基质中完成的。
本实验可以灵敏检测哺乳动物样本细胞内NADPH、NADP的水平以及相互的比率。组分中德酶体系可特异性的识别酶循环反应中NADPH/NADP，因此无需在分析前从样本内纯化NADPH/NADP。并且NADPH/NADP定量分析试剂盒只特异性的检测NADPH/ NADP，不会与NAD和NADH有反应。通过提供的循环酶反应可以大大提高检测的灵敏度和特异性。样本内NADPH/NADP的含量可以在酶标仪或读板仪OD450nm处读取获得。
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技术服务项目:病理形态学、细胞生物学、分子生物学、免疫与生化、组织与基因芯片、动物实验等.
长沙南科生物技术有限公司是一家专业提供医学、生物学实验技术服务和技术解决方案的生物科技公司，公司拥有完善的病理组织、分子生物、免疫与生化、细胞培养、病毒学、动物及裸鼠实验室，开展质粒构建、蛋白表达、抗体制作、医学及生物实验技术服务，已成功的为湘雅医学院、同济医学院、北京儿童医院、解放军301、309医院、华中农大、上海华山医院、上海瑞金医院、温州医学院、武大医学院、广东医学院、第三军医、第四军医、湖南省人医、湖南省肿瘤医院、湖南农大、湖南中医大、湖北中医大等单位提供了优质的实验技术服务以及相关产品和试剂。 南科生物面对医学院及其附属医院、医药科研院所、设有生物专业高校提供单项和整体课题实验技术服务，对于握有科研课题但工作繁忙而无暇分身的临床医生而言，只需要您将课题交付我们，剩下的工作由南科生物完成，我们可以为您节约大量宝贵的时间和精力；对于面临毕业压力的广大硕博士而言，我们乐于一起探讨课题方案的合理性并给出建议，程度上优化实验方案和节约资金；对于课题也许您还只有一个设想，南科生物只需要您的课题设想或目标，我们愿意和您一起讨论并确定合理的课题方案并付诸实施，直至论文交付和顺利毕业。
南科生物所追求的目标不仅仅是科研课题实施的过程，更多的时候我们关注实施前后的各个环节，客户满意将是南科生物动力。
南科生物力求建立诚信、优质、GX的服务形象，并以此确定南科在医学、生物学实验技术外包领域的领先地位。
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