磁珠法全血基因组DNA提取试剂盒

概述
本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和缓冲液系统，从样品中分离纯化高质量基因组DNA，特殊包被的磁珠，在一定条件下对目的DNA具有很强的亲和力，而当条件改变时，磁珠释放吸附的DNA，能够达到快速分离纯化DNA的目的。整个过程不涉及有毒试剂，安全、便捷、提取的DNA纯度高。使用本试剂盒纯化的基因组DNA (OD260-OD320)/(OD280-OD320)均在1.7～2.0之间，可以应用到各类下游分子生物学实验。

Production.no	名称	规格	储存条件	保质期
HRQX-040	磁珠法全血基因组DNA提取试剂盒	100T	4℃	180天

适用范围
从人类以及哺乳动物等血液中提取基因组DNA，适用于自动化核酸提取平台。
试剂盒包装及组成

试剂盒组成	数量
Buffer A	30 ml×1瓶
Buffer B	1 ml×1瓶
磁珠	1 ml×1瓶
洗涤液Ⅰ	80 ml×1瓶
洗涤液Ⅱ	30 ml×1瓶，使用前加入80 ml无水乙醇，混匀
洗脱液	10 ml×1瓶
使用说明书	1份

注意事项
1. Buffer B 4℃保存，可能会析出白色粉末状沉淀，使用前混合均匀，不影响使用效果。
2.磁珠用前一定要充分混匀。
3.如果同等取样量下欲得到更多DNA可以增加洗脱次数（洗脱次数Z好不要超过3次），也可以适当延长裂解时间（Z好不要超过30min）。
4.冻存血液应在室温或37℃缓慢解冻，不可高温加热，以免血凝块形成；将冻存的血液置于37℃摇床中150-200rpm融化，效果；也可提前一天放在4℃解冻。
操作步骤
1.裂解
取150µl抗凝全血到1.5mlEP管中，加入300µl Buffer A、10µl Buffer B，混合均匀（可用漩涡振荡器，1200～1800rpm）。然后把EP管置于恒温水箱中70℃温育30min。
2.结合 
将EP管从温浴设备中取出，加入振荡混匀的磁珠10µl，异丙醇300µl（自备），颠倒混匀5min。将EP管置于磁力架上进行磁分离，吸弃废液（吸净管盖及管底残液）。
3.洗涤
⑴ 加入800µl洗涤液Ⅰ，点振5～10次（若有团状或丝状物可增加点振次数及力度），然后磁分离，吸净管盖及管底的残液；
⑵ 加入500µl洗涤液Ⅱ，点振5～10次（若有团状或丝状物可增加点振次数及力度），然后磁分离，吸净管盖及管底的残液；
⑶ 重复步骤⑵一次，室温下开盖干燥5min。
4.洗脱
加入50～100µl洗脱液，缓慢抽吸混匀，70℃温浴5min。每隔2～3min轻摇EP管几下混匀。然后磁分离，小心吸取上清液至新
的EP管中，进行下游实验。
 
 
常见问题及参考意见

常见问题	可能的原因	建议
得率低	取样前没有充分混匀样品	每次取样前充分混匀样品，使白细胞均匀的悬浮于样品中
	结合不充分	结合过程中要使磁珠一直处于悬浮状态，结合时间严格按照说明书
	裂解不充分	样品粘稠度高或白细胞数目多容易造成裂解不充分，减少样品用量
	样品中白细胞含量太低	将样品低速离心，取白细胞层50µl，其他试剂用量严格按照说明书操作
	样品用量大于说明书给出量而其他试剂用量没有相应调整	严格按照说明书操作，如果需要增大样本量，可以等比例增大Buffer A、Buffer B以及磁珠用量，其他试剂用量可以不改变（但是要适当延长裂解时间）
无扩增条带或扩增条带不亮	TE影响扩增	用Tris将双蒸水pH调至8，代替TE洗脱
	用双蒸水代替TE洗脱，但没有调节pH	用Tris将双蒸水pH调至8，代替TE洗脱
	血液粘稠度高，晾干时间短	延长晾干时间
洗脱液颜色发黄	洗涤过程不充分	如果结合后磁珠呈团状、丝状或颗粒状，要增加点震力度及次数
	裂解不充分	样品粘稠度高或白细胞数目多容易造成裂解不充分，减少样品用量
	样品用量大于说明书给出量而其他试剂用量没有相应调整	严格按照说明书操作，如果需要增大样本量，可以等比例增大Buffer A、Buffer B以及磁珠用量，其他试剂用量可以不改变（但是要适当延长裂解时间）