AnnexinV-FITC细胞凋亡检测试剂盒

说明：
细胞凋亡是细胞的基本特征之一，它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面起着十分重要的作用。Annexin Ⅴ是一种分子量为35-36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine，PS）高亲和力特异性结合。以标记了FITC的AnnexinⅤ作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。
Propidium iodide（PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。将Annexin Ⅴ与PI匹配使用，可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞以及死细胞区分开来。

产品组成（50／25次反应）：

・ Anncxin V-FITC 500ul／250ul（20ug /ml）
・ Binding Buffer 40ml／20 ml
・ Propidium Iodide (PI) 250ul／125ul（50ug /ml）

保存条件: 2-8℃ 储存，有效期6个月。

注意事项：

1. 为保证得到理想的实验结果,在使用此试剂盒之前请认真阅读该注意事项。
2. 试剂（尤其是小瓶装的试剂）在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
3. Propidium iodide（PI）能通过皮肤吸收，对眼睛有刺激作用。
4. 此试剂盒仅供科研使用，不宜用于临床诊断。
5. 本试剂盒中提供的PBS为随试剂赠送，并非试剂盒的真正组成成分；细胞的洗涤同常规方法。



操作注意要点：

1. 整个操作过程动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞，尽量在4℃下操作。
2. 反应完毕后请尽快检测，因为细胞凋亡是一个动态的过程，反应1小时后荧光强度就开始衰变。
3. Annexin V-FITC和Propidium iodide是光敏物质，在操作时请注意避光。
4. 成功的检测凋亡受以下几种因素的影响，如细胞类型、细胞膜上PS的密度、发生凋亡时PS翻转的比例、诱导细胞凋亡的方法、所用试剂、诱导凋亡的时间等，把这些影响因素进行优化对实验成功是非常必要的。
5. 在细胞洗涤的一步，请尽量将上清弃净，以免PBS残留，有可能会影响实验结果。
6. PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高，建议首先进行Annexin V-FITC染色，上机前5分钟再加入PI染色。

操作步骤：

1. 整待测细胞的浓度为5×105-1×106个/ml。
2. 取1ml细胞，1000rpm，4℃离心10分钟，弃上清。
3. 加入1ml冷的PBS，轻轻震荡使细胞悬浮。
4. 1000rpm，4℃离心10分钟，弃上清。
5. 重复步骤3、4两次。
6. 对于贴壁细胞，先用胰酶消化，再用PBS洗涤。
7. 将细胞重悬于200ul Binding Buffer。
8. 加入10ul Annexin V-FITC和5ul PI，轻轻混匀，避光室温反应15分钟 或4℃反应30分钟。
9. 加入300ul Binding Buffer，在1小时内上机检测。
10. 若用荧光显微镜检测，将细胞混合液离心，取细胞沉淀涂片，再进行观察。