保存条件：
请于-20℃条件下保存
供应商：
上海康朗生物科技有限公司
保质期：
1年
英文名：
志贺氏菌核酸检测试剂盒（恒温荧光法）
数量：
大量
志贺氏菌核酸检测试剂盒（恒温荧光法）志贺氏菌核酸检测试剂盒（恒温荧光法）◆ 产品说明致病菌检测系列基于独特的恒温荧光检测技术，可针对食品、饲料等样品中的致病微生物的特异核酸片段进行扩增，仪器实时监测扩增过程中的荧光信号变化，自动判读结果。本产品用于志贺氏菌的检测。检出限为 103 CFU/ml。◆ 产品组成（48 测试）试剂 含量A-Shi-I 1200μL × 1 支B-I 55μL × 1 支C-I 1200μL × 1 支NG-I 50μL × 2 支PG-Shi-I 50μL × 1 支◆ 适用仪器Dhelix 1610、Dhelix 3210、ESE Tube Scanner、Genie II、Deaou-308c 等恒温荧光检测仪，ABI 7500，LightCycler480，CFX 96 等荧光 PCR 仪。◆ 自备耗材和仪器①灭菌 1.5mL 或 2.0mL 离心管；②灭菌 0.2mL PCR 管或八联管；③冰盒；④移液器（0.5-10μL，10-100μL，100-1000μL）及配套灭菌吸头；⑤离心机；⑥涡旋混匀器；⑦金属浴
◆ 注意事项1．本试剂检测灵敏度高。为了防止污染，实验要分区操作。1）区：试剂准备区。2）第二区：样本制备区。3）第三区：模板添加区。4）第四区：扩增及产物分析区。★ 分区之间Z好进行物理性隔离，避免人为因素造成的污染。2．实验过程中穿戴工作服和乳胶手套，不同区域独立使用工具，需更换手套和实验服。3．严格按照操作步骤操作，试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰盒上操作。4．反应液中的成分对光敏感，应避光保存。试剂使用前要完全解冻，但应避免反复冻融，推荐使用前离心 30秒，并按检测频次将反应液以适当体积分管保存。5．反应结束后，扩增管请置于密封袋内丢弃，当日清理，开盖易造成气溶胶污染，禁止开盖。6．不同批号试剂请勿混合使用，在有效期内使用。7. 检出限为 103 CFU/ml 是以 1 ml 103CFU/ml 增菌液离心后收集菌体再提取的细菌基因组 DNA 作为模板。◆ 样品处理参照《GB 4789.5-2012 食品安全国家标准 食品微生物学检验 志贺氏菌检验》中的 5.1 处理样品，对样品进行前增菌，制备的菌液保存待用。以无菌操作取检样 25 g（ml），加入装有灭菌 225 ml 志贺氏菌增菌肉汤的均质杯，用旋转刀片式均质器以 8000请于-20℃条件下保存，有效期 12 个月rpm/min～10000 rpm/min 均质；或加入装有 225 ml 志贺氏菌增菌肉汤的均质袋中，用拍击式均质器连续均质 1 min～2 min，液体样品振荡混匀即可。于 41.5 ℃±1℃，厌氧培养 16 h～20 h。详细步骤请按照标准操作或查阅食安通软件。◆ 实验操作将试剂完全解冻，各组分离心 30s。1. 试剂配制（试剂准备区，放置于冰盒中进行）：若有 N 个待检样品，则参照下表，按照 N+2 个数量计算各组分用量（N 个待检样品+1 个阴性对照+1 个阳性对照），将反应液置于 0.6ml 或者 1.5ml 离心管中，涡旋混匀，离心 30 秒，分装于 0.2ml PCR 管中，并向每管加入 1滴 C-I（约 20μl）。试剂 使用量A-Shi-I 22×(N+2)μLB-I 1×(N+2)μL反应液总体积 23×(N+2)μL2．模板制备（样本制备区）建议使用试剂配套细菌组 DNA 提取系列产品，具体过程详见产品说明书。3．添加模板（模板添加区，放置于冰盒中进行）在步骤 1 中已含有反应液的 PCR 管中加入 2μL 模板，顺序为 NG-I、待测样品模板、PG-Shi-I。涡旋混匀 30s，离心 1min，立即进行扩增反应。4. 扩增反应（扩增及产物分析区）①恒温仪器 63℃条件下反应 30 min。②若使用荧光定量 PCR 仪，则荧光基团选择 FAM，淬灭基团选择 None，将 63℃ 15 s，63℃ 45 s 作为一个循环，于 63℃ 45 s 处收集荧光信号，30 个循环。其他仪器请参照仪器说明书进行设置。◆ 结果判定①仪器自动判定结果，若显示“阳性”，则样品中含有志贺氏菌；若显示“阴性”，则样品中不含有志贺氏菌或含量低于检测限。②在荧光定量 PCR 仪上，根据有无“S”型扩增曲线判定结果。若有“S”型扩增曲线，则样品中含有志贺氏菌；若无“S”型扩增曲线，则样品中不含有志贺氏菌或含量低于检测限。★ NG 反应管结果显示“阴性”，PG 反应管结果显示“阳性”，此次检测结果有效，否则无效。如重复检测结果仍为无效，请与技术支持人员联系。
温馨提示：不可用于临床ZL。
