1、技术介绍
DNA甲基化在基因表达调控中扮演着重要的角色,参与生物体多种重要的生命活动。此外,DNA甲基化异常及其对基因表达的影响会导致人类的许多复杂疾病的发生,如癌症、神经疾病和糖尿病等。为了研究甲基化在人体内的重要作用,加速甲基化研究的临床进展,Illumina推出了高通量的450k甲基化芯片,并取得巨大成功。在此基础上,Illumina推出了新一代的升级版甲基化芯片Infinium MethylationEPIC BeadChip(简称850k芯片),为研究者提供了一个更经济可靠的甲基化研究平台。
Infinium MethylationEPIC BeadChip(简称850k芯片) 850K芯片可检测人全基因组约853,307个CpG位点的甲基化状态,其中包含了原450K芯片91%的位点,并增加了413,745个位点。850K芯片不但保持了对CpG岛,基因启动子区的全面覆盖,还特别加强了增强子区(来源于ENCODE及FANTOM5的研究进展)及基因编码区的探针覆盖。可广泛应用于干细胞研究、肿瘤和其他复杂疾病研究,是更适合于表观基因组全关联分析研究(EWAS)的一款芯片。
850k芯片覆盖位点1. 涵盖Infinium Methylation 450 BeadChip芯片中90%以上的位点
2. CpG岛以外的CpG位点
3. 人类干细胞中的非CpG甲基化位点(CHH位点)
4. 正常组织与肿瘤(多种癌症)组织差异甲基化位点
5. FANTOM5增强子
6. ENCODE开放染色质和增强子
7. 脱氧核糖核酸酶超敏位点
8. miRNA启动子区域
850k芯片优势1.
全面的基因组覆盖范围:检测> 850,000个CpG位点,全面覆盖CpG岛、启动子、编码区及增强子。
2.
高质量的数据:沿用了450k芯片的Infinium技术,同时采用Infinium I及II探针设计,使检测范围化。
3.
分辨率高:单碱基分辨率,可以直接检测到发生甲基化的准确位点。
4.
可重复性高:自身技术重复间的相关性以及与450K相同探针间的相关性R2 > 0.98。
5.
起始模板量低:仅需 250ng,大大节约了样品量。
6.
适用于FFPE样本。
2、技术路线
3、样品要求
1. 样品总量:每个样品总量不少于2ug。
2. 样品浓度:浓度不低于50ng/ul。
3. 样品纯度:OD 260/280值应在1.7~1.9 之间。
4. 样品质量:基因组完整、无降解、无RNA污染。
5. 样品运输:DNA低温运输(-20℃);且在运输过程中请用封口膜将样本密封好,以防出现污染。