点敲入小鼠
基本信息: 利用传统 ES方法、TALEN或者Cas9方法制备基因定点敲入小鼠。
技术原理: CRISPR/Cas9(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)是出现的一种由sgRNA指导Cas核酸酶对靶向基因进行特定DNA修饰的技术。在这一系统中,sgRNA引导序列靶定位点剪切双链DNA达到对基因组DNA 进行修饰的目的。CRISPR/Cas9系统能够对小鼠和大鼠基因组特定基因位点进行精确编辑,目前已经成功将此技术应用于大、小鼠基因KO/KI的模型制备,以及条件性敲除(Loxp系统)模型的制备。
采取优化过的野生型Cas9和双切口Cas9n(Optimized Cas9 System,OCAS and OCASn)。采用优化过的双切口Cas9n(OCASn)可以将脱靶效应降到。
CRISPR/Cas9技术特点: 1、可实现对靶基因多个位点或多个基因同时敲除;
2、实验周期短(3个月左右),价格低;
3、可应用于大、小鼠等,无物种限制。