Plant DNAzol 植物基因组DNA快速提取试剂

Plant DNAzol

植物基因组DNA快速提取试剂

【产品概述】

本产品适用于抽提植物的基因组DNA。提取方法简单快速，60 分钟内完成多个样品的处理。获得的DNA可直接用于Southern杂交、PCR、DNA克隆以及其他相关分子生物学实验操作。因其采用沉淀的方法，可以将不同大小片段的DNA全部沉淀下来，对于凋亡的DNA提取也非常有效。

【产品组分】Plant DNAzol   100 ml

【保存条件】室温保存，有效期二年。

【使用方法】

1. 组织破碎：

液氮破碎

1）将100mg～500mg的组织（叶片/花/茎/根/种子均可）用剪刀剪碎，在加液氮的条件下在研钵中捣成粉末，研磨时应间断加入液氮以防止组织融化。

2）研磨充分后加入1ml Plant DNAzol，2μl2-ME(β-巯基乙醇)继续研磨，可将研钵底部放置65℃水浴使组织慢慢融化。继续研磨使组织完全裂解（裂解产物应呈粘稠液体）。

3）转移750μl裂解产物至1.5ml离心管中。将离心管置65℃水浴 30 min。（对于葡萄等纤维比较多的组织适当延长时间）。

外力破碎

1）将100mg-500mg的组织（叶片/花/茎/根/种子均可）用剪刀剪碎，置于研钵或者匀浆器中，加入少量Plant DNAzol (100～200μl),用力研磨，

2）研磨充分后加入PlantDNAzo 800～900μl（与之前所加Plant DNAzol 总和是1ml），2μl2-ME(β-巯基乙醇)继续研磨，使组织完全裂解（裂解产物应呈粘稠液体）。

3）转移750μl裂解产物至1.5ml离心管中。将离心管置65℃水浴 30 min。（对于葡萄等纤维比较多的组织适当延长时间）。

2. DNA沉淀：

1）加750μl氯仿，混合均匀。12000rpm,离心5分钟。

2）小心取上清（DNA在上层,宁可少取上清，也不要吸到中间的蛋白），转入一新的1.5ml 管（这时体积大概有600μl）。

3）加0.7体积的异丙醇（约420μl），12000rpm,离心10分钟。弃上清，（可以直接倒掉，小心不要倒掉沉淀）.

3. DNA清洗：

1） 加入1 ml 75%乙醇至离心管中，颠倒数次以重悬DNA，直立离心管1 分钟至DNA团块沉至管底，倾去或吸除洗涤液。细小的DNA沉淀团块容易在倾倒洗涤液时丢失，可室温3,000x g离心3～5分钟，然后倾去或吸除洗涤液。

2） 重复清洗1次。

3） 简短离心，用枪头小心吸弃残留液体。

4. DNA溶解：

1） 室温静置数分钟（约10分钟）使残余乙醇挥发，注意不要完全晾干DNA。

2） 加入适量（100～200μl）灭菌双蒸水或TE缓冲液，使DNA 沉淀溶解。

3） 若DNA溶液中存在不可溶杂质，可于4℃ 12,000x g离心10 分钟，以去除杂质。

4） 4℃或-20℃保存DNA溶液。

【注意事项】

1.如Plant DNAzol 有盐份析出，加热溶解后不影响使用效果。

2.提取的DNA可能有少量RNA污染，一般不影响使用。如需去除RNA，可向DNA溶液中加入终浓度为40μg/ml的RNase A，37℃孵育 30分钟。