人蛋白质亚硝基化(PN)elisa试剂盒

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人蛋白质亚硝基化(PN)elisa试剂盒适用范围

2019年9月25日人蛋白质亚硝基化(PN)elisa试剂盒双抗体夹心法测定标本中人生存素 ( survivin)水平。用纯化的人生存素 ( survivin)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入生存素 ( survivin)，再与HRP标记的生存素 ( survivin)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成的黄色。颜色的深浅和样品中的生存素 ( survivin)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人生存素 ( survivin)含量。试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人生存素 ( survivin)水平。用纯化的人生存素 ( survivin)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入生存素 ( survivin)，再与HRP标记的生存素 ( survivin)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成的黄色。颜色的深浅和样品中的生存素 ( survivin)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人生存素 ( survivin)含量。肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是全世界范围内常见的恶性肿瘤之一,其发病率在恶性肿瘤中高居第六位,肿瘤相关死亡率居第三位。肝细胞癌患者生存率低,复发转移率高,而大多数患者在就诊时已属中晚期,其全部5年生存率仅为3-5%且仅有30-40%的HCC患者在确诊时适宜手术,因此早期筛查和诊断对于提高肝细胞癌患者的生存率和临床预后具有重要的意义。人生存素survivin是凋亡YZ蛋白家族中分子Z小的成员,近年来的研究发现其在肝癌、胃癌、癌、前列腺癌等多种肿瘤组织中呈高水平表达,而正常组织中几乎不表达,并且与化疗抵抗、肿瘤复发和肿瘤患者生存期有关。而关于survivin在肝细胞癌患者血清中的表达情况仅有2篇文献,且结论并不明确。磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(Glypican3,GPC3)是硫酸乙酰肝素糖蛋白中磷脂酰肌醇聚糖家族中的一员(GPC1-6),通过C端与糖基磷脂酰基醇的结合而锚定于细胞外膜上,其第358位的精氨酸与359位的丝氨酸发生解离,N端进入血液中,称为可溶性GPC3蛋白。大量研究发现GPC3在调节细胞增殖、分化中起到重要作用,且在胎肝和肝癌组织中特异性高表达,在正常成人组织中几乎无表达。对于GPC3在肝细胞癌血清中表达情况已有多篇文献报道,然而其结论并无一致性。人蛋白质亚硝基化(PN)elisa试剂盒

人蛋白质亚硝基化(PN)elisa试剂盒常见问题 
观察不同浓度大豆苷元(DAI)YZ人骨肉瘤MG63细胞增殖和诱导其凋亡与分化的作用.方法 培养人骨肉瘤MG63细胞,分成对照组和不同浓度DAI干预细胞组.采用噻唑蓝(MTT)法测定1、10、20、40、80、160 μ mol/L DAI对细胞增殖活性的影响,流式细胞术检测对照组、20、80 μmol/L DAI作用24h和48 h的细胞凋亡率,原位缺口末端标记法(TUNEL)法检测对照组、20、40、80 μmol/L DAI作用48 h的细胞凋亡率,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)、免疫细胞化学分别检测20、40、80 μmol/L DAI干预48 h细胞内过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)mRNA、生存素(Survivin)蛋白表达,磷酸苯二钠和酶联免疫吸附试验(ELISA)法分别检测对照组、10、20、40 μmol/L DAI干预6、9、12d细胞中碱性磷酸酶(ALP)活性和1、12、24 d细胞中Ⅰ型胶原蛋白表达,茜素红染色观察10、20、40 μmol/L DAI组细胞内钙盐沉积.结果 实验结果显示:1、10、20、40、80、160μmol/L DAI组24 h和48 h的细胞增殖YZ率分别为(10.91 ±6.29)％、(12.53±4.28)％、(18.80±4.14)％、(25.25±5.43)％、(43.99±0.71)％、(50.33±4.17)％和(12.17±4.87)％、(27.49±0.10)％、(31.06±2.86)％、(41.95±3.07)％、(61.53±4.02)％、(62.81±1.48)％,检测类风湿关节炎（RA）患者血清中肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂（TWEAK）和凋亡调节蛋白生存素（survivin）的水平,以探讨其在RA中的意义.方法 采用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法测定61例RA患者和35名健康对照组血清中TWEAK和survivin水平,同时测定RA患者关节功能、X线分期、关节压痛数和肿胀数、红细胞沉降率、类风湿因子、C反应蛋白等各项临床指标,进行相关性分析.结果 RA患者血清中TWEAK水平[（479±381）pg/ml]与健康对照组TWEAK水平[（421±87）pg/ml]差异无统计学意义.RA患者血清中survivin水平[（159±82）pg/ml]比对照组[（119±24）pg/ml]ZG（P＜0.05）,且血清gurvivin水平与RA患者关节X线分期呈正相关（r=0.29,P＜0.05）.结论 血清TWEAK水平与RA的关系还需要更深入的研究.Survivin与关节侵蚀性相关,可能成为新的判断病情及ZL的新指标.可溶性CD40配体(s CD40L)对人白血病K562细胞增殖、生存素(survivin)m RNA表达和白介素8(IL-8)表达水平的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)法检测s CD40L对K562细胞增殖的影响,通过RT-PCR检测survivin m RNA表达水平,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定IL-8表达情况。结果不同浓度的s CD40L(0.5、1.0、1.5、2.0、2.5μg/m L)对K562细胞增殖均有YZ作用,且可降低survivin m RNA及IL-8的表达水平;s CD40L细胞组细胞增殖YZ率高于K562细胞组,survivin m RNA及IL-8表达水平均低于K562细胞组,差异均有统计学意义(P0.05),且呈剂量-时间依赖性。结论 s CD40L在体外能够明显YZK562细胞增殖,具有剂量-时间依赖性,s CD40LYZK562细胞增殖可能与survivin m RNA及IL-8表达水平下调相关。p27kip1是新近发现的一种抑癌基因，早期研究表明p27kip1基因转移能显著YZ食管癌细胞和人食管癌裸鼠移植瘤的生长，表明该基因疗法可能是食管癌ZL的新途径，但其抑癌机制尚未完全阐明。目的：研究p27kip1基因转移对食管癌细胞生存素（survivin）表达和端粒酶活性的影响。从而阐明p27kip1的抑癌机制，为p27kip1基因ZL食管癌提供理论依据。方法：将携带p27kip1基因的重组腺病毒（Ad—p27kip1）和LacZ重组腺病毒（Ad—LacZ）分别转染食管癌细胞系Eca9706，观察细胞形态变化。以免疫细胞化学染色和蛋白质印迹法检测p27kip1和生存素的表达．以端粒重复序列扩增程序（TRAP）聚合酶链反应（PCR）-酶联免疫吸附测定（ELISA）检测端粒酶活性。结果：经Ad—p27kip1转染后，Eta9706细胞变圆，呈葡萄串样聚集以致脱落。细胞p27kip1表达明显增强，生存素表达降低，端粒酶活性显著受YZ。结论：p27kip1基因YZ食管癌细胞生长的作用机制可能与下调生存素表达和YZ端粒酶活性有关。

人蛋白质亚硝基化(PN)elisa试剂盒注意事项 
研究siRNA表达质粒沉默Survivin基因的效率及 其对大肠癌细胞株SW480凋亡、增殖和侵袭性的影响.方法:构建Survivin基因的siRNA表达质粒(pRNAT/sur-siRNA),用 Westeron-blot和半定量RT-PCR研究该表达质粒转染SW480后Survivin蛋白和mRNA表达的变化,流式细胞仪检测 Survivin基因沉默后SW480细胞凋亡的变化,MTT法检测SW480细胞体外增值的变化:细胞侵袭性实验研究SW480细胞的侵袭性变化.结 果:针对Survivin的siRNA的表达质粒下调大肠癌SW480细胞株Survivin蛋白和mRNA的表达水平,分别为 85.0%,80.0%;pRNAT/sur-siRNA转染SW480后,SW480细胞凋亡率为16.9%;细胞增殖YZ率为37.4%,与对照组相 比有显著差异(P＜0.01);细胞侵袭实验示pRNAT/sur-siRNA/SW480细胞、pRNAT/SW480、SW480细胞的细胞穿透数分 别为153±66、505±65、578±98个,(P＜0.01).结论:针对Siurvivin的siRNA可以显著降低Survivin的表达,从 而YZ肿瘤细胞的增殖和侵袭,促进肿瘤细胞的凋亡.观察血清多肽类激素及单胺类神经递质在胃溃疡患者中的变化。方法：收集2013年1月~2014年9月期间来我院就诊的胃溃疡患者186例,经胃镜检查证实活动期92例,愈合期45例,瘢痕期49例。纳入健康志愿者50例,作为正常对照组。采用ELISA试剂盒法检测血清中胃肠激素胃泌素（Gas）、肾上腺髓质素（AM）、胃动素（MTL）、生长抑素（SS）、降钙素基因相关肽（CGRP）水平和胃黏膜组织中神经介质5-羟色胺（5-HT）、P物质（SP）、血管活性肠肽（VIP）、去甲肾上腺素（NE）水平。结果：胃溃疡患者血清中Gas、AM、MTL水平显著高于正常健康人群,SS和CGRP则显著低于正常健康人群,不同病期胃溃疡患者血清多肽类激素水平存在显著差异（P〈0.05）。胃溃疡患者胃黏膜组织中5-HT、SP和NE水平显著低于正常健康人群,而VIP水平则显著高于正常健康人群,不同病期胃溃疡患者胃黏膜组织中单胺类神经递质水平存在显著差异（P〈0.05）。枳朴方中空栓在预防和ZL术后肠麻痹方面的作用机制.方法 选用雌性大鼠,切除子宫建立术后肠麻痹模型,采用Elisa试剂盒观察枳朴方中空栓对血清中胃动素(MTL)、胃泌素(Gas)和一氧化氮(NO)含量的 影响.结果 假手术对照组较空白对照组MTL、Gas含量略低,NO略高,但差异无统计学意义(P＞0.05)；模型组较空白对照组MTL、Gas含量明显降低,NO 明显ZG(P＜0.01)；西沙必利中空栓组与枳朴方中空栓高剂量组较模型组MTL、Gas含量明显ZG,NO明显降低(P＜0.01)；枳朴方中空栓低 剂量组较模型组MTL、Gas含量ZG,NO降低(P＜0.05).结论 枳朴方中空栓能够提高术后肠麻痹大鼠血清中的MTL和Gas含量,降低NO含量,以达到调控胃肠运动的目的,可预防和ZL术后肠麻痹.脑肠轴对功能性消化不良的发生起着重要的作用,通过对功能性消化不良患者胃动素和胆囊收缩素的观察,探讨脑肠轴与功能性消化不良的关系。方法 35例FD患者和20例健康志愿者禁食后插入消化道动力测压管,分别于MMC的Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期采静脉血,用胃动素检测试剂盒测量MTL值。所有患者和健康志愿者禁食8~10h,空腹抽取静脉血2ml后,进标准脂肪餐,每隔30min抽取静脉血2ml,一共抽取5次,0、0.5、1、1.5和2h,胆囊收缩素(CCK)ELISA试剂盒测量CCK水平。结果 FD组各消化间期的血浆胃动素值均低于健康志愿组,其中消化Ⅱ期和消化Ⅲ期的胃动素差异有统计学意义(P0.05和P0.01);FD组进脂餐前后0、0.5、1.0、1.5和2h CCK水平均显著高于正常健康志愿组,差异有统计学意义(P0.01),FD组进脂餐后,CCK水平不断升高,1.5h达到峰值,2h开始下降。正常健康志愿组进餐后,CCK水平也不断升高,1h达到峰值,1.5h开始下降。结论胃动素和胆囊收缩素作为重要的脑肠肽,对功能性消化不良的产生起着至关重要的作用,FD患者的胃动素水平降低,胆囊收缩素ZG。

人蛋白质亚硝基化(PN)elisa试剂盒使用方法

 功能性消化不良和肠易激综合征同属于功能性胃肠病的范畴，而且是西方国家的常见疾病。功能性胃肠病在我国同样有着较高的发病率。但是近年亚洲多国研究发现，由于人种、地域、文化和饮食生活习惯的差异，亚洲国家的功能性胃肠病在流行病学、临床特征、病因和发病机制等方面均与西方国家呈现不同特点。虽然功能性胃肠病不会威胁患者的生命，但是却在一定程度上影响着患者的生活质量。由于功能性胃肠病发病机制的复杂性，功能性胃肠病的ZL至今仍然是消化科医生的一大难题。现今功能性胃肠病的ZL手段十分有限，主要包括抑酸、根除幽门螺杆菌、促进胃肠动力和抗抑郁药ZL等。 　　多年来，阿米替林作为一种三环类抗抑郁YY于功能性消化不良和肠易激综合征的ZL，并取得了良好的临床LX。国外已有学者试图探索阿米替林和去甲替林（阿米替林在人体内的代谢产物）对健康志愿者胃动力以及内脏敏感性的可能影响。但是由于人种的差异，药物对西方国家与亚洲国家人群的影响可能不同。 　　本试验不同于以往研究，还将探索小剂量阿米替林对健康志愿者血清脑肠肽的影响。胃动素是一种由22个氨基酸残基组成的神经肽，并且具有促进胃排空的功能。有研究表明，胃动素还可以减少功能性消化不良患者的近端胃容量。研究重症急性炎（SAP）大鼠胃肠动力障碍的发生机理。方法 SD大鼠32只,按抽签法随机均分为2组：假手术（SO）组和SAP组。采用双极银丝电极记录大鼠胃窦部消化间期复合肌电活动（IMC）,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定血清胃动素（MTL）及血管活性肠肽（VIP）的浓度,并进行组织病理学评分。结果与SO组比较,SAP组MTL浓度明显下降、VIP浓度明显升高（P〈0.01）。与SO组比较,SAP组IMC周期以及Ⅰ、Ⅱ相时间延长,Ⅲ相时间缩短,Ⅲ相峰电振幅及频率下降（P〈0.01）;SAP组大鼠中的MTL浓度与IMCⅢ相时间呈正相关关系（r=0.967,P〈0.01）,VIP浓度与IMCⅢ相时间呈负相关关系（r=-0.592,P〈0.05）。组织病理学评分SAP组明显高于SO组（P〈0.01）。结论 SAP时大鼠存在胃肠激素的紊乱,并且通过影响胃肠道平滑肌电活动而导致胃肠动力障碍。开胃消食合剂对功能性消化不良(FD)大鼠的ZL作用及相关机制。方法将60只雄性Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、阳性药组、开胃消食合剂低剂量组、开胃消食合剂中剂量组、开胃消食合剂高剂量组,空白组正常饲养,其余采用饥饱失常和夹尾激怒法构建FD模型。持续造模14 d后,灌胃ZL14 d,实验结束。观察各组大鼠状态,记录体重,用葡聚蓝-2000灌胃来测定大鼠的胃排空率和小肠推进率。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清和十二指肠中胃动素(MTL)和生长抑素(SS)的含量。结果与空白组比较,模型组体重下降(P <0.01)；与模型组比较,开胃消食合剂中、高剂量组能增加大鼠体重(P <0.05或P <0.01)。与空白组比较,模型组胃排空率降低(P <0.01)；与模型组比较,开胃消食合剂高剂量组能增加胃排空率(P <0.05)。与空白组比较,模型组小肠推进率明显降低(P <0.01)；与模型组比较,开胃消食合剂低、中、高剂量组小肠推进率均有所升高,但差异无统计学意义(P> 0.05)。与空白组比较,模型组血清和十二指肠中MTL含量明显降低(P <0.05或P <0.01)；与模型组比较,开胃消食合剂高剂量组能增加血清和十二指肠中MTL的含量(P <0.05或P <0.01)。对结肠慢传输型便秘 (STC)患者血浆胃动素 (MTL)含量的分析 ,探讨血浆MTL水平与STC患者结肠动力变化的关系。方法 :采用放射免疫法测定 2 1例STC患者和 33例正常人空腹及餐后 1h的血浆MTL水平 ,分析两者的差异 ,并将患者血浆MTL水平与结肠运输试验的标记物排出率做相关分析。结果 :2 1例STC患者的空腹和餐后 1h的血浆MTL含量分别为 (2 2 7 92± 90 4 6 )ng/L ,(2 6 7 94± 12 6 6 8)ng/L ,低于正常组的(2 88± 12 7 83)ng/L ,(336 16± 116 0 6 )ng/L。两者比较 ,差异有显著性 (P 0 0 5 ) ;STC患者餐后 1h的MTL含量与结肠运输试验的标记物排出率呈线性正相关 (r =0 5 5 ,P 0 0 1)。结论 :MTL释放减少可能是STC发病机制中的一个重要环节。

人蛋白质亚硝基化(PN)elisa试剂盒工作原理 

通过比较患者ZL前与ZL后临床症状的改善程度及积分,观察逍遥散颗粒联合西药对胆汁反流性胃炎(肝郁脾虚型)的治LX果;通过观察胆汁反流性胃炎(肝郁脾虚型)患者ZL组与对照组ZL前与ZL后血浆胃动素的变化,分析逍遥散颗粒对胆汁反流性胃炎(肝郁脾虚型)ZL的作用机制。方法:收取60例符合本次试验入选标准的患者为观察ZL和研究对象,30例ZL组和30例对照组均随机分配,并统计分析两组患者在年龄、性别、病程、胆汁反流情况。ZL组给予逍遥散颗粒1剂/天,早晚各一次,温水冲开服用;多潘立酮(吗丁啉)片,3次/天,1片/次,饭前半小时服用;奥美拉唑肠溶胶囊,早晚各一次,20mg/次,饭前半小时服用。对照组给予单纯西药口服,多潘立酮(吗丁啉)片,3次/天,一次10mg,饭前半小时服用;奥美拉唑肠溶胶囊,早晚各一次,一次20mg,饭前30min服用。疗程为2个月。符合入组标准患者抽取空腹静脉血2ml,应用放射免疫法检测患者血浆内胃动素(MTL)值、中医临床证候积分及胃镜下观察结果;并用同样方法收集2个月疗程结束后病人各项指标,比较两组患者,做出治LX果评价。结果:1、ZL组和对照组患者疗程结束后总有效率及中医临床证候LX构成分布均有明显差别(P0.05);中医证候有效率分别为:ZL组:96.67%,对照组:86.67%。人蛋白质亚硝基化(PN)elisa试剂盒