人黑皮质素(Melanocortin)elisa试剂盒

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人黑皮质素(Melanocortin)elisa试剂盒应用领域
2019年9月24日人黑皮质素(Melanocortin)elisa试剂盒制备抗人神经生长因子（h NGF）单克隆抗体,并开发一种检测h NGF含量的ELISA试剂盒。方法以重组人神经生长因子抗原与弗氏完全佐剂混合免疫BALB/c小鼠,并采用杂交瘤技术制备抗h NGF的单克隆抗体,然后建立快速检测h NGF含量的ELISA检测试剂盒。结果获得1株可分泌抗h NGF单克隆抗体的杂交瘤细胞株。建立1种检测h NGF含量的ELISA试剂盒,该检测方法的回收率为85%-105%,灵敏度为0.63 ng/ml,变异系数〈10%,且特异性良好。结论成功制备了抗h NGF的单克隆抗体,并建立了一种可快速检测h NGF含量的ELISA试剂盒。人黑皮质素(Melanocortin)elisa试剂盒

人黑皮质素(Melanocortin)elisa试剂盒主要优点

  β-神经生长因子(β-NGF)慢病毒表达载体p LVX-TRE3G-IRES-β-NGF,应用Tet-on 3G四环素诱导表达系统,探讨β-NGF在人胚肾(HEK293FT)细胞中的过表达情况,及其对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞分化的影响。方法从SD大鼠脑组织提取总RNA,反转录成c DNA,利用分子生物学技术,克隆鼠β-NGF基因完整编码区,将β-NGF基因定向插入载体p LVX-TRE3G-IRES中。将重组载体p LVX-TRE3G-IRES-β-NGF和载体p LVX-Tet3G分别转染空白HEK293FT细胞,制备收获慢病毒,共转染HEK293FT细胞,同时用不同剂量QL霉素(Dox)诱导NGF表达(分为未转染组、0、100、500和1000μg/L Dox诱导表达组)。48h后收集细胞,免疫印迹法(Western blotting)检测各组细胞内β-NGF表达情况。同时收集培养上清,1.ELISA检测各组上清内β-NGF的分泌量;2.制作条件培养基,加入PC12细胞培养基中进行诱导培养,观察PC12细胞诱导分化情况。结果双酶切和测序鉴定重组质粒p LVX-TRE3G-IRES-β-NGF序列和方向正确;β-NGF在转染细胞内被诱导表达,随着Dox剂量增加,表达量增强;β-NGF在培养基的上清内表达,表达量随Dox剂量增加而增多。诱导表达的条件培养基可诱导PC12细胞形态改变,表达神经元特异性烯醇化酶(NSE)蛋白。.β-神经生长因子(p-NGF)转染的大鼠内皮祖细胞分化功能的变化. 方法 将人β-NGF重组腺病毒(Ad-EGFP-hβ-NGF组)及其阴性对照(Ad-EGFP组)感染至大鼠内皮祖细胞,同时设置空白对照(NC)组,观察 细胞形态学改变,Western blot检测不同组酪氨酸蛋白激酶A(TrkA)表达水平,ELISA法检测不同组培养液中血管内皮生长因子(VEGF)、血管性血友病因子(vWF)及 碱性成纤维生长因子(bFGF)水平. 结果 Ad-EGFP-hβ-NGF感染至大鼠内皮祖细胞1周后可见部分细胞成球,呈干细胞样改变.Ad-EGFP-hβ-NGF组内皮祖细胞TrKA相对蛋白 表达水平(0.67±0.23)明显高于Ad-EGFP组(0.20±0.07)及NC组(0.27±0.12)(P＜0.01).Ad-EGFP- hβ-NGF组培养液中VEGF、vWF及bFGF水平明显高于Ad-EGFP组及NC组(P＜0.01). 结论 β-NGF通过激活酪氨酸激酶信号通路,增加促血管生长因子的分泌,促进内皮祖细胞的分化,多途径发挥血管修复和再生的功能。

人黑皮质素(Melanocortin)elisa试剂盒工作原理

利用腺相关病毒(AAV)载体介导人β-神经生长因子(β-NGF)基因转染猫角膜内皮细胞,探讨其对该细胞生物学效应的影响。 方法:体外培养猫角膜内皮细胞,通过细胞形态学观察、神经特异烯醇化酶(NSE)单克隆抗体免疫组织化学染色鉴定细胞的种类及纯度。腺相关病毒载体介导绿荧光蛋白基因转染猫角膜内皮细胞,根据绿色荧光蛋白的阳性表达率测定重组腺相关病毒对猫角膜内皮细胞的感染效率。利用构建的AAV-β-NGF病毒颗粒将人β-NGF基因转染至猫角膜内皮细胞,Real-Time PCR及ELISA分别在mRNA和蛋白水平检测转染后12h、1d、3d、5d、7d时β-NGF的表达变化。转基因后3d通过猫角膜内皮细胞MTT值检测细胞增殖能力的变化,流式细胞仪测定处于G1期的细胞比例,检测外源基因对细胞周期的影响。 结果:猫角膜内皮细胞体外培养可形成完整纯净的细胞单层,经形态学观察、NSE的免疫组织化学染色证明为纯净的猫角膜内皮细胞。腺相关病毒介导的绿色荧光蛋白基因转染猫角膜内皮细胞24h后,在荧光显微镜下可见到细胞内清晰的绿色荧光,镜下随机计数10个视野中荧光细胞的百分率,测得转染效率可达67.5%。AAV-β-NGF病毒颗粒转染内皮细胞后,Real-Time PCR及ELISA结果显示,转染后各时间点猫角膜内皮细胞中β-NGF mRNA和蛋白的表达随时间延长不断ZG,5天时表达量,随后略有下降，重组人β-神经生长因子(Recombinant humanβnerve growth factor,rhβ-NGF),并对表达产物进行纯化和生物学活性鉴定。方法构建rhβ-NGF杆状病毒表达质粒Bacmid+[rhβ-NGF],利用脂质体cellfectionⅡ将质粒转染至昆虫细胞Sf9中,用转染细胞的上清反复感染Sf9细胞,大量收获含目的蛋白的培养上清,利用离子交换层析和分子筛层析纯化rhβ-NGF,纯化产物经SDS-PAGE和Western blot分析,并通过鸡胚背根神经节培养法检测rhβ-NGF的生物学活性。结果重组表达质粒Bacmid+[rhβ-NGF]经测序证实构建正确;重组病毒感染的Sf9细胞可表达rhβ-NGF;纯化的rhβ-NGF蛋白经SDS-PAGE分析,可见相对分子质量约14 200的单一条带,纯度大于98%,能与兔抗人NGF单克隆抗体特异性结合,并能刺激神经节突起生长,其比活性约为600 000 AU/mg。细胞外基质蛋白Del-1（developmental endothelial locus-1）在癌组织及细胞中的表达情况，并探讨Del-1蛋白对癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法：采用免疫组织化学法检测81例导管腺癌组织及39例正常组织中Del-1蛋白的表达水平，并分析Del-1表达与癌患者临床病理参数和生存期的关系。采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测Del-1在正常细胞hTERT-HPNE及6种癌细胞（AsPC1、BxPC3、CFPAC-1、HPAC、PANC1和SW1990）中的表达水平。应用10和100 nmol/L重组Del-1蛋白分别处理癌PANC1和AsPC1细胞，然后采用CCK-8、FCM和蛋白质印迹法分别检测细胞增殖、饥饿诱导凋亡、失巢凋亡以及Bcl-2和Bax蛋白表达水平的变化。结果：导管腺癌组织中Del-1的高表达率为80.2%（65/81），明显高于正常组织的10.3%（4/39），2者差异有统计学意义（P< 0.001)。导管腺癌组织中Del-1表达与肿瘤大小及神经侵袭与否存在相关性（P值均< 0.05），而与肿瘤位置和TNM分期等无关（P值均> 0.05）。Kaplan-Meier分析结果显示，Del-1高表达组患者的中位生存期明显低于Del-1低表达组（P< 0.01）。人α1微球蛋白（alpha 1-microglobulin,α1-MG）ELISA定量检测试剂盒,并初步应用于临床标本的检测。方法用重组人α1-MG蛋白免疫小鼠,采用杂交瘤技术制备特异性单克隆抗体,对单抗的特性进行鉴定后,采用双抗体夹心ELISA方法制备α1-MG试剂盒,并进行线性范围、灵敏度、准确性、精密性验证。应用制备的试剂盒检测100份健康人血清中的α1-MG含量,计算正常参考值;分别应用试剂盒及放射性免疫分析法（radioactive immunoassay,RIA）检测87份人血清标本,分析试剂盒与RIA法检测结果的相关性。结果经间接ELISA法筛选及克隆化培养,共获得4株稳定分泌抗α1-MG单抗的杂交瘤细胞株;制备的试剂盒线性范围为0.5-60 mg/L,灵敏度为0.03 mg/L,检测不同浓度α1-MG的回收率在92.7%-97.1%之间,批内、批间变异系数（CV）分别为4.78%-8.57%和4.30%-6.84%;该试剂盒检测健康人血清样本中α1-MG含量正常参考值为15-32 mg/L,与RIA法的检测结果具有良好的相关性（r=0.958 6）。结论制备的人α1-MG ELISA检测试剂盒具有较高的准确性和灵敏度,且与RIA法具有良好的相关性,符合临床免疫分析的要求,适用于临床检测和科研应用。试剂盒保存:-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时).2.有效期:6 个月3.浓洗涤液会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶.4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影 响.5.中,英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准.Del-1是一种细胞外基质蛋白,在胚胎发育过程中由内皮细胞分泌,也可由多种肿瘤细胞表达.Del-1在胚胎发育、血管生成、KY及肿瘤发展过程中的作用被广泛研究,有望成为多种疾病诊治尤其是肿瘤诊治中的新型靶标.本文将综述Del-1在细胞微环境特别是肿瘤微环境中发挥的作用并探讨其研究前景。




人黑皮质素(Melanocortin)elisa试剂盒注意事项

Abstract The human Usher syndrome (USH) is the most frequent cause of combined deaf-blindness. USH is genetically heterogeneous with at least 12 chromosomal loci assigned to three clinical types, USH1-3. Although these USH types exhibit similar phenotypes in human, the corresponding gene products belong to very different protein classes ａnd families. The scaffold protein harmonin (USH1C) was shown to integrate all identified USH1 ａnd USH2 molecules into protein networks. Here, we analyzed a protein network organized in the absence of harmonin by the scaffold proteins SANS (USH1G) ａnd whirlin (USH2D). Immunoelectron microscopic analyses disclosed the colocalization of all network components in the apical inner segment collar ａnd the ciliary apparatus of mammalian photoreceptor cells. In this complex, whirlin ａnd SANS directly interact. Furthermore, SANS provides a linkage to the microtubule transport machinery, whereas whirlin may anchor USH2A isoform b ａnd VLGR1b (very large G-protein coupled receptor 1b) via binding to their cytodomains at specific membrane 。

人黑皮质素(Melanocortin)elisa试剂盒适用范围 

慢性粒细胞白血病(CML)，简称慢粒，是一种恶性克隆增殖性造血系统疾病，起源于多能造血干细胞。95％的慢粒患者在遗传学上具有Ph染色体，是9号染色体上的ABL基因与22号染色体上的BCR基因相互融合，形成bcr-abl融合基因，其编码的P210融合蛋白参与形成了慢粒特征性的分子生物学标志。因为P210蛋白具有失调的酪氨酸激酶活性，故bcr-abl融合基因可以导致白血病的发生。造成造血细胞出现过度增殖，对基质的粘附性较前下降和凋亡丧失等生物学特性的改变。BCR-ABL融合蛋白同时能激活多条与细胞增殖有关的信号通路，能改变DNA损伤修复途径，引起致命性的血液系统肿瘤。因此，目前慢粒的各种ZL方法都是围绕着bcr-abl基因和其编码的融合蛋白。 CMLZL的显著性进展为酪氨酸激酶YZ剂伊马替尼的临床应用，在慢性期患者中LX显著，在加速期和急变期的患者中同样能够明显延长患者的生存时间，是目前ZL慢性粒细胞白血病的主要药物之一，美国国家癌症综合网络(NCCN)首推伊马替尼作为ZL慢粒的药物。从2000年开始我国在临床上应用伊马替尼进行ZLCML，Z近几年的临床观察结果显示，常规剂量伊马替尼(300~400 mg/d)对大部分慢性期Ph+CML患者可以取得满意的LX。正常朊蛋白 (Pr PC)也可以在外周组织包括人的血液中表达。血液中大部分 Pr PC在血浆中被发现。我们提出了血管内皮细胞是血液中朊蛋白来源泉的假说。反转录 PCR证实人的脐静脉血管内皮细胞 (HU VEC)和微血管内皮细胞 (HMEC- 1)可表达朊蛋白的 m RNA;流式血细胞计数法证实 ,在细胞活性没有一定的特殊规律时 ,HUVECS 和HMEC- 1S(两种细胞所含的 Pr PC分子分别为每细胞中12 0 90 0± 15 0 5 8和 5 832 7± 4 5 77)能表达 Pr PC;免疫荧光共聚焦显微镜检测证实 ,HMEC- 1S和 HU VECS膜表面呈现 Pr PC阳性 ,采用时控强化解离免疫荧光分析法 (DEL FIA )对细胞培养基质进行分析 ,表明这两种细胞可缓慢释放可溶性Pr PC位与其活性无关。与 Von Willebrand致病因子抗原相反 ,当病人患有 Von Willebrand疾病时 ,采用去氨加压素ZL时 ,病人体内血浆 Pr PC水平下降。采用不同数量的血液样品测定病人体内血浆的 Pr PC证明 ,Pr PC的浓度和细胞的数量没有相关性。但是 ,当病人处于肾功能衰竭时 ,血浆中Pr PC的水平较高。总之 ,不论是大血管还是小血管的内皮细胞都可以表达高水平的 Pr PC,这些 Pr PC能释放入细胞培养基中。遗传性骨、软骨发育障碍性侏儒症包括很多疾病，目前通过临床观察和影像研究，已经发现200多种不同的表 型，较常见的有软骨发育不全(achonｄrop lasia，ACH，MIM 100800)、软骨发育低下(hypochondroplasia，HCH，MIM 146000)、致死性侏儒(thanatophoric dysplasia，TD，MIM187600)、假性软骨发育不全(pseudoachondroplasia，PSACH，MIM 177170)和多发性骨骺发育不全(multiple epiphyseal dysplasia，MED，MIM 132400)、迟发性脊椎骨骺发育不良(spondyloepiphyseal dysplasia tarda；SED tarda，SEDT，MIM 271600)、先天性脊椎骨骺发育不良(spondyloepiphyseal dysplasia congenita，SEDC，MIM183900)等。这些遗传性侏儒症临床症状相似，影像学检查也时常难以鉴别，因此在分子水平开展基因诊断是确诊、 鉴别这些疾病的重要环节，同时也是有效开展产前诊断的必备条件。对遗传性侏儒已知致病基因的突变检测和新突变的功能鉴定是目前进行基因诊断的主要策略。本 文采用基于PCR技术的DHPLC，限制性酶切鉴定、PCR产物直接测序和ARMS等方法对近年来收集到的2种罕见遗传性侏儒病的致病基因进行了突变检 测，并运用跨物种同源序列比对、野生型和突变型蛋白质结构预测等生物信息学方法对新突变进行了致病性鉴。

人黑皮质素(Melanocortin)elisa试剂盒性能特点 

杜氏肌营养不良(DMD)是儿童Z常见的一种肌营养不良症,以肌肉进行性消耗以及到12岁左右行走能力丧失必须借助于轮椅行动为特征,目前这种肌病尚没有根治手段,对症ZL的目的主要是延长患儿的行走时间。本项研究的目的旨在初步评估小剂量糖皮质激素是否具有稳定或提高DMD患儿肌力和行走能力的作用。 方法： 临床试验：美国神经协会及儿童神经协会在总结了美国1966年至2004年有关糖皮质激素ZLDMD的有关数据后,提出DMD的激素ZL策略,并将强的松0.75mg/kg/day作为推荐剂量,适当剂量的激素ZL能增加患儿肌力和呼吸功能,延长患儿行走的时间,显著减慢肌无力的进展。本实验参考了美国同行的剂量标准,设计了ZL方案。入组条件设定为经基因分析发现为DMD基因缺失或经肌肉活检确诊的DMD患儿,年龄段控制在5至10岁。实验采取随机、双盲、对照的原则,对募集的患儿进行分组。激素ZL组患儿采取强的松0.75mg/kg/day,对照组用维生素C 3mg/day。ZL时间为3个月,每隔1个月随访一次,随访3个月,并记录每次就诊时的数据。我们募集了31例符合条件的DMD患儿,其中ZL组17例,对照组14例。所有患儿每次接受肌力检查、肺功能测定、行走9m及登9级台阶(阶梯高度17cm)时间的测定。单区抗体是一类新型的小分子抗体,拥有易操作和识别隐藏的抗原位点等优点。但是其较低的亲和力和“毒性”不足限制了在临床上广泛地应用。本研究从提高单区抗体的功能亲和力(avidity)和增强单区抗体的生物活性两方面尝试对单区抗体进行工程改造。 利用多聚化来提高单区抗体的功能亲和力。为了避免在重组抗体中引入免疫原性,我们选择了一段来自人软骨多聚基质蛋白的卷曲螺旋多肽COMP48作为多聚化骨架。我们将这种新型的重组抗体分子命名为combody,它是由来自于天然的骆驼单区抗体库的单区抗体和COMP48构成的融合蛋白。combody实现了单区抗... 展开 单区抗体是一类新型的小分子抗体,拥有易操作和识别隐藏的抗原位点等优点。但是其较低的亲和力和“毒性”不足限制了在临床上广泛地应用。本研究从提高单区抗体的功能亲和力(avidity)和增强单区抗体的生物活性两方面尝试对单区抗体进行工程改造。利用多聚化来提高单区抗体的功能亲和力。为了避免在重组抗体中引入免疫原性,我们选择了一段来自人软骨多聚基质蛋白的卷曲螺旋多肽COMP48作为多聚化骨架。我们将这种新型的重组抗体分子命名为combody,它是由来自于天然的骆驼单区抗体库的单区抗体和COMP48构成的融合蛋白。combody实现了单区抗体的五聚化。肿瘤的发SF展是一个多基因参与、多因素调控、多阶段逐步演变的错综复杂的过程。导致细胞增殖与分化异常、促进细胞恶变为癌的根本原因就是某些基因结构的变异或表达的失控。近年来与肿瘤发SF展相关的分子事件日益受到重视：癌基因激活，抑癌基因失活，细胞内信号传导通路、细胞周期和细胞凋亡途径受到异常调控，等等。其中肝细胞生长因子／扩散因子(hepatocyte growth factor／scatter factor，HGF／SF)和Met受体结合后启动的细胞内酪氨酸激酶信号传导通路在肿瘤的浸润生长中起着非常重要的作用，HGF／SF促进细胞分裂、运动、形态发生，它和Met受体的异常表达被认为是肿瘤恶性标志之一。 肝细胞生长因子激活因子的YZ因子1(hepatocyte growth factor activator inhibitor type 1，HAI-1)于1997年首次被发现，是一种Kunitz型的丝氨酸蛋白酶YZ因子。HAI-1可特异地YZ肝细胞生长因子激活因子(hepatocyte growth factor activator，HGFA)和新近发现的SNC19／matriptase。这两种丝氨酸蛋白酶都是HGF／SF的激活因子，HGF／SF的单链前体被激活为有活性的双链异二聚体后才能介导细胞内信号传导。SNC19／matriptase除了激活HGF／SF，还可以降解细胞外基质(extracellular matrix，ECM)。人黑皮质素(Melanocortin)elisa试剂盒