Tecna玉米赤霉烯酮检测试剂盒

本试剂盒用于定量检测样本中玉米赤霉烯酮残留。

检测样本：谷物、饲料、酒糟

样本前处理：

-研磨、CH3OH-水溶液提取、过滤或离心；

分析时间：15分钟（不包括样本前处理时间）

检测限：

-谷物：25ppb

特异性：交叉反应率（%）

1. 检测原理

本试剂盒在预包被特异性玉米赤霉烯酮抗体的微孔内进行。将酶标玉米赤霉烯酮和标准品或样本在预混合孔混合后转移到包被玉米赤霉烯酮抗体的微孔，孵育时，标准溶液或样本中的玉米赤霉烯酮和酶标玉米赤霉烯酮竞争微孔上的玉米赤霉烯酮抗体结合位点，洗板除掉所有未结合的酶标玉米赤霉烯酮或自由玉米赤霉烯酮分子。然后加入一定量显色底物反应以检测酶活性。加终止液终止反应，450nm波长酶标仪检测，标准品或样品中的玉米赤霉烯酮浓度与吸收光强度成反比。

2.试剂盒组成
微孔板：96孔，预包被玉米赤霉烯酮抗体。板条可拆开单独使用。

预混合板：空白，未包被抗体。

玉米赤霉烯酮标准溶液：5瓶，各1.5ml，浓度分别为：0ppb，25ppb，100ppb，500ppb，2000ppb。

酶偶联物：1瓶，14ml。

10X浓缩洗液：1瓶，50ml。

显色液：1瓶，15ml。

终止液：1瓶，9ml。

3.需要使用但试剂盒不提供的试剂和设备
-CH3OH

-蒸馏水或去离子水

-NaCl

-天平

-研磨器

-摇床（可选）

-台式离心机或Whatman 1滤纸

-恒温箱

-氮吹仪

-20-200μl、100-1000μl移液器及吸头
-50-300μl多道移液器及吸头
-含450nm波长的酶标仪

4.注意事项
-仅用于体外检测。
-一些试剂内含防腐剂；终止液内含有硫酸，具有腐蚀性；酶偶联物对身体有害。
-小心操作，避免试剂接触皮肤、眼睛和粘膜。

5.操作和存储说明
-2-8°C冷藏保存，切勿冷冻。
-将未用完的板条用试剂盒提供的铝箔袋重新密封。
-切勿使用过期产品。
-不同批次试剂盒内的成分不能混用。
-请使用试剂盒内提供的说明书。

6.样本前处理步骤

-将样本混合均匀并充分研磨；

-称取50g研磨样本，并加入10g NaCl，再加入250ml 70%CH3OH溶液。可选方案：称取5g研磨样本，并加入1g NaCl，再加入25ml 70%CH3OH溶液。

-充分振荡3分钟。

-选择下列步骤的其中一个：1）过滤样本（Whatman 1）并收集滤液；2）3500g离心力下离心5分钟，并收集上清液。如果浓度范围在10-2000ppb，所得滤液或上清液可直接用于检测。否则，用70%CH3OH溶液稀释样本5倍，以获得125-10000ppb浓度范围。

建议样本的称取量为50g，以使得到更具代表性的样本。

7．工作溶液准备

玉米赤霉烯酮标准品：即用；

酶偶联物：即用；

洗液：用蒸馏水1：10稀释（1+9）。注意：如果出现结晶，将溶液置于室温并搅拌直至结晶完全溶解。

稀释后的洗液在室温放置24小时内有效，2-8°C放置两周内有效。

显色液：即用。显色液对光敏感，应避免光直射，避光保存。

终止液：即用。

8.检测步骤

8.1检测前注意事项

-检测前将所有试剂室温放置1小时；

-使用后立即将所有试剂放置于2-8°C；

-不得改变检测程序；

-不得延长或缩短孵育时间；

-孵育温度不得高于25°C或低于18°C；

-孵育过程中不得晃动酶标板；

-使用JZ的移液器及吸头；

-一旦开始实验，不要间断地完成所有步骤，不要让微孔干透；

-ELISA方法结果的再现性很大程度取决于洗板过程的效率和一致性，要按照介绍的程序洗板；

-为避免交叉污染，加不同样品和标准品时要更换移液器吸头；

-不得让吸头接触到微孔内的液体或者微孔内表面；

-孵育时要避免光直射。建议孵育时用封板膜封板。

8.2检测步骤

1.计算需要用到的微孔数量，标记光吸收值孔、标准品孔和样本孔的位置。注意要考虑到都要做重复。取出需要的板条，并将未使用的板条重新用铝箔袋密封。准备同等数量的预混合板条。

2.每个预混合孔加100μl酶偶联物。

3.将标准品、样本加50μl到对应预混合孔。

4.用移液器将预混合孔内溶液混匀（上下吹打3次），并立即吸取100μl到对应包被呕吐毒素抗体的微孔。注意：吸取不同微孔溶液时，要更换吸头以避免交叉污染。

5.室温孵育10分钟。不得延长孵育时间，孵育时不要晃动微孔板。

6.洗板顺序

-孵育后，倒掉孔内液体；

-将微孔加满工作浓度洗涤液，然后倒掉洗涤液；

-用力上下在吸水纸上拍板，将微孔内液体完全拍干。

重复洗涤过程3次。

在干净的吸水纸上拍板，拍干微孔内的液体。但不可使微孔干透。

7.显色：用多道移液器加100μl显色液到微孔，来回晃动数秒钟。

8.室温避光孵育5分钟。

9.用多道移液器加50μl终止液到各孔。来回晃动数秒钟充分混匀。

10.在15分钟内，用酶标仪450nm波长读数。

9. 计算结果

-计算标准品和样品的平均吸光值；

-用计算得到的平均吸光值分别除以0标准品的吸光值并乘以100；

标准品的吸光度值（或样品）

－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－ X100= (%)吸光度值

0标准的吸光度值 (Bo )

-以标准品浓度值（ng/ml）的半对数值为横坐标，B/B0值为纵坐标绘制标准曲线；

-将样本的B/B0值带入校准曲线，得到相应的浓度值(ppb)；

-由于标准品浓度已经考虑了样本稀释倍数，从标准曲线读到的浓度值即为样本中玉米赤霉烯酮的浓度。

-如果应用50-5000浓度范围，则结果为从标准曲线读到的浓度值乘以稀释倍数5.

10．样品标准曲线示例

11.结果评价

计算出结果后，还需要验证检测效果。通过将得到的结果和说明书提供的技术参数比较验证。如果结果与参数不符，请检测试剂盒的有效期、读取吸光值使用的波长、以及操作过程是否正确。如果不是操作错误，请联系我们的技术支持。

12.试剂盒参数

13．免责声明

出现阳性结果时，必须用确证方法对样本检测。TECNA公司不承担任何因为使用者错误使用试剂盒造成的损失。