牛奶黄曲霉毒素M1 ELISA检测试剂盒
本试剂盒用于定量检测牛奶样本中黄曲霉毒素M1残留。
检测样本:原奶、奶粉
样本前处理:
-原奶:2-8°C冷藏,离心
-奶粉:稀释
分析时间:75分钟(不包括样本前处理时间)
检测限:
-原奶:0.005ppb
-奶粉:0.05ppb
特异性:交叉反应率(%)
分析物 | 交叉反应率 |
黄曲霉毒素M1 | 100 |
黄曲霉毒素M2 | 16 |
1. 检测原理
本试剂盒在预包被特异性黄曲霉毒素M1抗体的微孔内进行。将黄曲霉毒素M1标准品和样本加入微孔,次孵育时,自由的黄曲霉毒素M1分子和黄曲霉毒素M1抗体结合,洗板除掉所有未结合的物质。加入黄曲霉毒素-HRP偶联物进行第二次孵育,偶联物封闭所有未次孵育时未结合的抗体结合位点,然后加入一定量显色底物反应以检测酶活性。加终止液终止反应,450nm波长酶标仪检测,标准品或样品中的黄曲霉毒素M1浓度与吸收光强度成反比。
2.试剂盒组成
微孔板:96孔,预包被黄曲霉毒素M1抗体。板条可拆开单独使用。
黄曲霉毒素M1标准溶液:7瓶,各1.5ml,浓度分别为:0ppt,5 ppt,10 ppt,25 ppt,50 ppt,100 ppt,250 ppt。
酶偶联物:1瓶,250ul浓缩酶偶联物。
酶偶联物稀释液:1瓶,20ml。
20X浓缩洗液:1瓶,50ml。
显色液:1瓶,15ml。
终止液:1瓶,9ml。
3.需要使用但试剂盒不提供的试剂和设备
-蒸馏水
-离心机,Z好是冷冻离心机。
-20-200μl、100-1000μl移液器及吸头
-20-300μl多道移液器及吸头
-含450nm波长的酶标仪
4.注意事项
-仅用于体外检测。
-一些试剂内含防腐剂;终止液内含有硫酸,具有腐蚀性;酶偶联物对身体有害。
-小心操作,避免试剂接触皮肤、眼睛和粘膜。
5.操作和存储说明
-2-8°C冷藏保存,切勿冷冻。
-将未用完的板条用试剂盒提供的铝箔袋重新密封。
-切勿使用过期产品。
-不同批次试剂盒内的成分不能混用。
-请使用试剂盒内提供的说明书。
6.样本前处理步骤
6.1原奶
-必须在挤奶后24小时内检测,否则必须用叠氮化钠或类似物做稳定处理。
-2-8°C预冷样本,并将样本在2-8°C、离心力3000g离心10分钟。
-分离除去脂肪。
-所得脱脂奶直接用于检测。
-如果样本中黄曲霉毒素M1浓度在10-500ppt范围,用样本稀释液(MA444)将样本2倍稀释,以使样本的黄曲霉毒素M1浓度达到有效检测范围。从标准曲线所读值乘以稀释倍数2为样本中的浓度值。
-如果样本中黄曲霉毒素M1浓度在25-1250ppt范围,用样本稀释液(MA444)将样本5倍稀释,以使样本的黄曲霉毒素M1浓度达到有效范围。从标准曲线所读值乘以稀释倍数5为样本中的浓度值。
-如果样本中黄曲霉毒素M1浓度在10-500ppt范围,用样本稀释液(MA444)将样本10倍稀释,以使样本的黄曲霉毒素M1浓度达到有效范围。从标准曲线所读值乘以稀释倍数10为样本中的浓度值。
6.2奶粉
-称取10g奶粉,用蒸馏水定容至100ml。
-摇晃直至奶粉完全溶解。样本稀释倍数为10.
7.工作溶液准备
黄曲霉毒素M1标准品:即用(使用前轻摇混匀);
酶偶联物:注意,为了收集到管内所有酶偶联物,使用前低速离心数秒钟。计算当次实验的需要量,用酶稀释液将浓缩酶偶联物1/100稀释(例如,20ul浓缩酶偶联物+1980ul酶稀释液)。稀释混匀过程不得剧烈震荡。每次吸取浓缩酶偶联物的量不得少于20ul。
洗液:用蒸馏水1:20稀释(1+19)。注意:如果出现结晶,将溶液置于室温并搅拌直至结晶完全溶解。
稀释后的洗液在室温放置24小时内有效,2-8°C放置两周内有效。
显色液:即用。显色液对光敏感,应避免光直射,避光保存。
终止液:即用。
酶稀释液:即用
8.检测步骤
8.1检测前注意事项
-检测前将所有试剂室温放置1小时;
-使用后立即将所有试剂放置于2-8°C;
-不得改变检测程序;
-不得延长或缩短孵育时间;
-孵育温度不得高于25°C或低于18°C;
-孵育过程中不得晃动酶标板;
-使用JZ的移液器及吸头;
-一旦开始实验,不要间断地完成所有步骤,不要让微孔干透;
-ELISA方法结果的再现性很大程度取决于洗板过程的效率和一致性,要按照介绍的程序洗板;
-为避免交叉污染,加不同样品和标准品时要更换移液器吸头;
-不得让吸头接触到微孔内的液体或者微孔内表面;
-孵育时要避免光直射。建议孵育时用封板膜封板。
8.2检测步骤
1.计算需要用到的微孔数量,标记光吸收值孔、标准品孔和样本孔的位置。注意要考虑到都要做重复。取出需要的板条,并将未使用的板条重新用铝箔袋密封。准备同等数量的预混合板条。
2.加入100ul各标准品/样本到相应微孔,轻摇混匀后封板膜封板。
3.室温孵育45分钟。不的延长次孵育时间,不能使用自动振荡器。
4. 洗板
-孵育后,倒掉孔内液体;
-将微孔加满工作浓度洗涤液,然后倒掉洗涤液;
-用力上下在吸水纸上拍板,将微孔内液体完全拍干。
重复洗涤过程4次。
在干净的吸水纸上拍板,拍干微孔内的液体。但不可使微孔干透。
5.用多道移液器,每孔加入100ul酶偶联物溶液。来回轻摇混匀并盖封板膜。
6.孵育15分钟。
7.重复步骤4洗板。
8.显色:用多道移液器加100μl显色液到微孔,来回晃动数秒钟。
9.室温避光孵育15分钟。
10.用多道移液器加50μl终止液到各孔。来回晃动数秒钟充分混匀。
10.在1小时内,用酶标仪450nm波长读数。
9. 计算结果
-计算标准品和样品的平均吸光值;
-用计算得到的平均吸光值分别除以0标准品的吸光值并乘以100;
标准品的吸光度值(或样品)
---------------------------- X100= (%)吸光度值
0标准的吸光度值 (Bo )
-以标准品浓度值(ng/ml)的半对数值为横坐标,B/B0值为纵坐标绘制标准曲线;
-将样本的B/B0值带入校准曲线,得到相应的浓度值;
-要得到样本中黄曲霉毒素M1的浓度值,还需要将从校准曲线读到的浓度乘以相应样本的稀释倍数。
10.样品标准曲线示例
11.结果评价
计算出结果后,还需要验证检测效果。通过将得到的结果和说明书提供的技术参数比较验证。如果结果与参数不符,请检测试剂盒的有效期、读取吸光值使用的波长、以及操作过程是否正确。如果不是操作错误,请联系我们的技术支持。
12.试剂盒参数
描述 | 参数 |
平均Bo吸光度 | ≥0.7 OD450nm |
B/Bo 50% | 20-50ppt |
标准品平均变异系数 | ≤ 6 % |
13.免责声明
出现阳性结果时,必须用确证方法对样本检测。TECNA公司不承担任何因为使用者错误使用试剂盒造成的损失。
供应霉菌毒素试剂盒 | 黄曲霉毒素B1 |
呕吐毒素 |
玉米赤霉烯酮 |
T2毒素 |
赭曲霉毒素 |
伏马毒素 |