人抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体(MCV)ELISA试剂盒用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗体的微孔中依次加入标本或者标准品、生物素化的抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物显色。
工作原理
一、人抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体(MCV)elisa试剂盒工作原理用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗体的微孔中依次加入标本或者标准品、生物素化的抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物显色。底物在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成的黄色。颜色的深浅和样品浓度呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定OD值,计算样品浓度。二、应用领域ELISA法是免疫诊断中的一项新技术,现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定,根据已经使用的结果,认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标本的检查,而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此,也适合于血清流行病学调查。本法不仅可以用来测定抗体,而且也可用于测定体液中的循环抗原,所以也是一种早期诊断的良好方法。因此ELISA法在生物医学各领域的应用范围日益扩大,可概括四个方面:1 免疫酶染色各种细胞内成份的定位。2 研究抗酶抗体的合成。3 显现微量的免疫沉淀反应。4 定量检测体液中抗原或抗体成份。三、人抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体(MCV)ELISA试剂盒的优点体现:·特异性高:进行了广泛的非特异性排查,避免了由于交叉反应和干扰导致的实验数据误差。
·精 度 高:通过加标回收率和线性稀释实验,确保样本值的准确性,精确度高于同类产品(较低的CV%)。
·重复性好:lot-to-lot检测确保Z小的批间差异。
·可靠性强:经优化的试剂盒组分可有效的阻止假阳性和假阴性试验结果。
·标准曲线:在保证JZ数据的前提下提供较宽的检测范围,以满足需求。
·价格低廉:原装进口RD试剂,国内分装配置,大大减少了客户因为价格高而必须购买国产试剂盒的顾虑。
四、正确操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件 1. 加样后及时放人孵箱,标本较多时,要分批操作。按说明步骤严格控制操作时间,防止孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗彻底。
2. 显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用。
3. 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
4. 合理安排检测量,以免反应板过多造成洗板等待时间长。
操作流程五、人抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体(MCV)ELISA试剂盒技术流程双抗体夹心法(检测未知抗原) 1、用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml。在反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次。2、加样:加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。3、加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.05ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。4、加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。5、终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml6、结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。 间接法(检测未知抗体)1、用包被缓冲液将已知抗原稀释至1-10ug/ml, 每孔加0.1ml,4℃过夜。次日洗涤3次。2、加样:加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)3、加酶标抗体:于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.05ml,37℃孵育30-60分钟,洗涤,一遍用DDW洗涤。4、加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。5、终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml6、结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。储存方式六、人抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体(MCV)ELISA试剂盒的储存日期有多久?对于我们购买回来的Elisa试剂盒储存及有效期,相信大家都是根据盒子上的日期决定它的有效期的,但是如果我们实验开封过的试剂盒,怎么确定它有多久的有效期呢?这点可能很多人不知道该如何保存。不用担心,我司为您详细解析关于Elisa试剂盒的储存于有效期多久。根据我司规定未开封的试剂盒:所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意,收到试剂盒后请尽快将标准品、检测溶液A、检测溶液B以及96孔板保存于-20℃。老师们再使用后的试剂盒:剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存,开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于-20℃,避免潮湿。温馨提示:试剂盒内酶标条可拆卸,按实验需求可分多次使用;使用后的剩余试剂盒建议在首次实验后1个月内使用完毕。产品过期时间以盒子上的标签为准,保质期内所有组分都确保是稳定的。