人组胺(HIS)ELISA试剂盒加样:加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)
一、人组胺(HIS)elisa试剂盒技术服务
我们可以根据您的应用需要,比如在检测范围、种属以及灵敏度等方面有特殊要求,而量身定制检测试剂盒,有效控制检测试剂成本。并可提供免费代测。
工作原理
二、ELISA试剂盒检测概述
ELISA(酶联接免疫吸附反应分析)是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的GX催化作用相结合起来的一种敏感性很高的实验技术。 由于抗原、抗体的反应在一种固相载体-聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行,每加入一种试剂孵育后,可通过洗涤除去多余的游离反应物,从而保证试验结果的特异性与稳定性。
实际应用中,通过不同的设计,具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。目前我们对客户提供比较常用的ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法服务。
操作流程
三、人组胺(HIS)ELISA试剂盒技术流程
双抗体夹心法(检测未知抗原)
1、用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml。在反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次。
2、加样:加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
3、加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.05ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。
4、加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。
5、终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml
6、结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
间接法(检测未知抗体)
1、用包被缓冲液将已知抗原稀释至1-10ug/ml, 每孔加0.1ml,4℃过夜。次日洗涤3次。
2、加样:加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)
3、加酶标抗体:于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.05ml,37℃孵育30-60分钟,洗涤,一遍用DDW洗涤。
4、加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。
5、终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml
6、结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
四、Elisa试剂盒报告内容及标准
1、ELISA标准曲线;
2、详细的实验步骤;
3、完整的实验报告(试剂耗材,实验方法,实验结果及结果说明);
4、实验进行阶段,我公司客服人员会及时向您汇报实验进程。
性能特点
五、人组胺(HIS)ELISA试剂盒具备价廉质保特色优点
1.灵活运用:我司试剂在目前市场上包含种属、种类上千种。
2.降低成本:我公司实验室采进口原料包备,价格实惠,能为您节省开支。
3.R&D认可:通过美国R&D公司认可,荣获代理权,质量放心且保证。
4.另提供无成分试剂-试剂不含配方,不造成环境重金属污染。
5.包装精良:透明玻璃管附铁氟龙旋盖,直径16mm,外盒为生物可分解材质,具环保概念。
六、上海沪鼎为您解决ELISA试剂盒操作常见问题:
问:客户用48T试剂盒,大概只有十个样所以他一次用不完那么多板条,但是他想做两次,可封板膜只有一张,那如果用完了怎么办?可以用什么别的东西取代吗?
答:可以把封板膜剪掉,用多少剪多少也可以用封口膜替代。
问:实验过程中温育是放在哪温育呢?
答:可以在水浴箱、细胞培养箱和烘干箱里面都行,只要恒定温度为37度。
问:客户买了试剂盒后没用,但是标准品稀释了以后(如240pg/ml的标准品)他放了半个月现在还能用吗?
答:1、稀释倍数分2部,如果是固体样本送样的话,都是按照10%进行匀浆处理,然后离心取上清液进行实验,根据样本的实际浓度再选择一个稀释倍数。固体的样本计算是根据匀浆比例来转换为IU/g的。
2、原则上标准品是临配临用,低位浓度的标准品是不好保存的.如果保存恰当,半个月内,240PG/ML的标准品应该没什么问题,但不能保证。
代测服务
七、人组胺(HIS)ELISA试剂盒代测服务要求
客户提供待检测样品,收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定;(实验结果仅能用作科研用途)
a检测的样本为细胞培养上清、细胞粗提液、人和动物的血清、血浆等。
b样本收集后应立即-20保存,若长期保存应-70。
c样本量要求:原则上做单孔检测应不少于100μl。建议若样本量充足Z好提供更多量样本
d建议客户在取材前先与我司销售技术人员沟通,前期的取材流程会直接影响您实验的结果 。
实验报告内容大致包括以下:
详细的实验步骤、实验方法、所用试剂、仪器、标准曲线、数据分析,实验结果将以电子发送。